猪肺泡巨噬细胞（3D4-21）

猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)
细胞介绍
母细【xì】胞3D4来源于pSV3neo质粒转【zhuǎn】染猪原【yuán】代肺泡巨噬【shì】细胞得到的。该克隆通过G418筛选得到。
 
细胞特性
1)来源：猪肺
2)形态：巨噬细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在显微镜下【xià】确认细胞生长状态【tài】，去掉封【fēng】口膜并将T25瓶【píng】置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果细胞长满【mǎn】（90%以上）请【qǐng】及时进【jìn】行细胞传代，传代培养用6ml本【běn】公司附【fù】带的*培养基。
5.接到【dào】细胞次日，请【qǐng】检查细胞是否【fǒu】污染，若发现污染或疑似污染，请及【jí】时与【yǔ】我们取【qǔ】得电联。
 
猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基（RPMI-1640，GIBCO)，90%;添加0_lmM NEAA, ImM丙酮酸钠【nà】；胎牛血清，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿【shī】度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅【xùn】速放入37°C水【shuǐ】浴中（水面要低于冻存管盖【gài】部）摇晃解【jiě】冻，移入事先准备好【hǎo】的含【hán】有4mL培养基的15ml离【lí】心管【guǎn】中混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离【lí】心4分钟，弃去上【shàng】清液，加入lmL培养基后吹匀【yún】。然后【hòu】将所有细胞悬液移【yí】入【rù】含有5ml培【péi】养基的培养瓶中【zhōng】培养过【guò】夜。第二【èr】天换液并检【jiǎn】查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去【qù】培养上清，用【yòng】不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-23次。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-23分钟，然后在显微镜【jìng】下观察【chá】细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿操作台，轻【qīng】敲几下培养【yǎng】瓶后【hòu】加【jiā】入3ml此【cǐ】细胞的培【péi】养基终【zhōng】止消化。轻轻【qīng】吹【chuī】打后吸出，移入15ml离【lí】心管【guǎn】中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，加【jiā】入【rù】lmL培【péi】养液【yè】后吹匀。移入到【dào】事先准备好【hǎo】的含【hán】有5ml培养【yǎng】基的T-25培养瓶【píng】中或含有14ml培养基的T-75培【péi】养【yǎng】瓶中培养。细胞【bāo】冻【dòng】存：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先要消化处理并【bìng】进行【háng】细胞计数。消化方【fāng】法按照细胞传【chuán】代方法【fǎ】的9-23步【bù】骤进行，后的重悬【xuán】液使用血清【qīng】。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬【xuán】浮，加DMSO至终浓度为【wéi】10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分【fèn】配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻【dòng】存。
 
猪肺泡巨噬细胞(3D4-21)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染，请立即与【yǔ】我们【men】电联【lián】。
所有动物【wù】细胞均视为有潜在的生【shēng】物【wù】危害性，必须【xū】在二级生物安全台内操作，并请注【zhù】意防护，所【suǒ】有废液及接触过【guò】此细【xì】胞的【de】器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。