人胚肾上皮包装细胞（GP2-293）

人胚肾上皮包装细胞(GP2-293)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM 培养【yǎng】基(DMEM，GIBCO,90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37°C，培养箱湿【shī】度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中（水面【miàn】要低 于【yú】冻存管盖部）摇晃解冻，移【yí】入事先准备好的含有【yǒu】4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，加入【rù】lmL培 养基后【hòu】吹匀【yún】。然后【hòu】将所有细【xì】胞悬液移入含有5ml培养基【jī】的培养瓶中培养过夜。 第二天【tiān】换液并检查细【xì】胞【bāo】密【mì】度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胚肾上皮包装细胞(GP2-293)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离【lí】子的【de】PBS润洗细胞【bāo】9-22次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-22分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观察【chá】细胞【bāo】消【xiāo】化情况，若细胞大部 分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加入【rù】3ml此细胞的培养基终止消化。轻轻吹打【dǎ】后吸出，移【yí】入15ml离心管【guǎn】中，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，加【jiā】入lmL培养液后吹【chuī】匀。移入到事先【xiān】准备好【hǎo】的含有5ml培养基【jī】的T-25培养瓶中或含有14ml培养 基的T-75培养瓶中培养。
细胞【bāo】冻存：待细胞生长状态良好【hǎo】时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细【xì】胞冻存时，先要消化处理并进【jìn】行细胞【bāo】计数。消化方法按照细胞【bāo】传代方法的9-22步骤【zhòu】进行， 后的重悬液使用血清。悬浮细【xì】胞直接计数后离【lí】心，用【yòng】血清重【chóng】悬【xuán】浮，加DMSO 至终【zhōng】浓度【dù】为10%。加入DMSO后【hòu】迅速【sù】混匀，按每lml的数量分配【pèi】到冻存管中。本【běn】公司按每个冻存【cún】管细胞数目大于【yú】1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请【qǐng】立【lì】即与【yǔ】我们电联。
所有动物细胞均【jun1】视为有【yǒu】潜在的生物【wù】危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内操作，并【bìng】请注意【yì】防护，所有【yǒu】废液及接触过此【cǐ】细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肾上皮包装细胞(GP2-293)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微【wēi】镜【jìng】下确【què】认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果【guǒ】细胞【bāo】长满（90%以上）请及【jí】时进行细胞传代，传代培养用【yòng】6ml本公司附带的*培【péi】养基【jī】。
5.接到【dào】细胞次【cì】日，请【qǐng】检查细胞是否污染【rǎn】，若发现污染或疑似污染【rǎn】，请及时与我们【men】取得电联。
细胞用途：仅供使用。