人主动脉血管平滑肌细胞 （HA-VSMC）

人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 F-12K 培养【yǎng】基（F-12K: GIBCO，添加 0.05 mg/ml 抗 坏血酸，0_01 mg/m丨胰岛【dǎo】素，0.01 mg/ml转铁蛋白，1，0.03 mg/ml ECGS，10 mM HEPES，10 mM TES，1%P/S;北美胎牛血清(United States, GIBCO)，10%。

2. 培养【yǎng】条件：气【qì】相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37°C，培养箱湿度 为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管迅速放入37°C水【shuǐ】浴中（水【shuǐ】面要低【dī】于【yú】冻【dòng】存管盖部）摇晃解冻，移入事先【xiān】准备好的含有4mL培养基的15ml离【lí】心 管中【zhōng】混合均匀。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清液【yè】，加【jiā】入【rù】lmL培 养基后吹匀【yún】。然后【hòu】将所有细【xì】胞悬液移入含有5ml培养基的培【péi】养瓶中【zhōng】培养【yǎng】过夜。 第二天换液并【bìng】检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细胞9-20次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶【píng】中，置【zhì】于37°C培【péi】养箱中消【xiāo】化9-20分【fèn】钟，然后在显微镜下观【guān】察细胞【bāo】消化情况，若细胞大【dà】部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加【jiā】入【rù】3ml此细胞的【de】 培【péi】养基终止消化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心【xīn】4分钟，弃去上清液，加入lmL培养【yǎng】液后吹匀。移入到事先准【zhǔn】备好的含有5ml培【péi】养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养【yǎng】基的T-75培养瓶中培养。
 
细胞冻存【cún】：待【dài】细胞生长状态良好时，可进行细【xì】胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时【shí】，先要消化【huà】处理【lǐ】并进行细胞计数。消【xiāo】化【huà】方法按照细胞传代方法的【de】9-20步骤进行，后【hòu】的重悬液使用血清。悬浮细胞直【zhí】接计数后离心，用血清重悬【xuán】浮【fú】，加DMSO至终【zhōng】浓【nóng】度为【wéi】10%。加入DMSO后迅速【sù】混匀，按每【měi】lml的数量分配到【dào】冻存【cún】管 中。本公司按每个冻【dòng】存管细【xì】胞数目大于1X106个细胞冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰【bīng】己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞【bāo】有污染【rǎn】，请立【lì】即与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞【bāo】均视【shì】为有【yǒu】潜在的生物危害性【xìng】，必须在二级生物【wù】安全台内操【cāo】作【zuò】，并请注意防护， 
细胞特性：
1)来源：血管平滑肌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人主动脉血管平滑肌细胞 (HA-VSMC)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细胞【bāo】生长【zhǎng】状态【tài】，去掉封【fēng】口膜并将T25瓶置于37°C培养约【yuē】 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满【mǎn】（90%以【yǐ】上）请【qǐng】及【jí】时进行细胞传代，传代培【péi】养用6ml本公司附带【dài】的*培养基。
5.接到细胞次日【rì】，请检查细胞是否【fǒu】污染【rǎn】，若发现污染或【huò】疑似污染，请及时与我【wǒ】们取得电联【lián】。
细胞用途：仅供使用。