人肺腺癌细胞（HCC-78）

人肺腺癌细胞(HCC-78)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO，90%;胎【tāi】牛【niú】
血清，10%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻【dòng】存【cún】管迅速放入37°C水浴【yù】中（水面要低【dī】于冻【dòng】存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培【péi】养基的15ml离【lí】心【xīn】管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，加入lmL培【péi】养基【jī】后吹匀。然【rán】后将所有【yǒu】细胞【bāo】悬液移入【rù】含有【yǒu】5ml培养基【jī】的培养【yǎng】瓶【píng】中培养【yǎng】过夜。 第二天换【huàn】液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

人肺腺癌细胞(HCC-78) 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离子的【de】PBS润洗细胞9-22次。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在【zài】显微镜下观察细胞消化情【qíng】况，若细【xì】胞大部分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入【rù】3ml此细胞的 培【péi】养【yǎng】基终止消化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中【zhōng】，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分【fèn】钟， 弃【qì】去上清【qīng】液【yè】，加入【rù】lmL培养【yǎng】液后吹匀【yún】。移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基【jī】的T-75培养瓶【píng】中培养。
 
细胞冻【dòng】存【cún】：待细胞生【shēng】长状态【tài】良好时【shí】，可【kě】进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞【bāo】冻存时，先要【yào】消化处理并【bìng】进行细胞计【jì】数。消化方法按照细胞传代方法的9-22步骤【zhòu】进行，后【hòu】的重悬【xuán】液使用【yòng】血清。悬浮细胞【bāo】直接计数【shù】后离心，用血清重悬浮，加【jiā】DMSO至终【zhōng】浓度为10%。加入【rù】DMSO后迅速混【hún】匀，按每【měi】lml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目【mù】大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若【ruò】发现干冰己挥发干净、冻存【cún】管瓶【píng】盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们电联。
所有动【dòng】物细胞均视为【wéi】有潜【qián】在的【de】生物危害性，必须在二级生物安全台内【nèi】操作，并请注意防【fáng】护【hù】，所有废液及接【jiē】触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后【hòu】方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：肺腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌细胞(HCC-78)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确【què】认细胞生长状态，去掉封【fēng】口膜并【bìng】将T25瓶置【zhì】于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4. 如果【guǒ】细【xì】胞长【zhǎng】满（90%以上）请及时【shí】进行细胞传代，传代培养【yǎng】用6ml本公司附带的*培养【yǎng】基。
5.接到细胞【bāo】次日，请检查【chá】细【xì】胞是否【fǒu】污染【rǎn】，若发现【xiàn】污染或疑似污染，请及时与我【wǒ】们取得电联。
细胞用途：仅供使用。