人髙转移肝癌细胞（HCCLM3）

人髙转移肝癌细胞(HCCLM3)
细胞介绍：
用人【rén】肝癌细胞株MHCC97-H接种裸鼠【shǔ】，进行3次肺转移筛选，取肺转【zhuǎn】移【yí】瘤建【jiàn】成皮下接种【zhǒng】后高度自发性肺转移【yí】的肝癌细胞【bāo】系。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO， 北【běi】美胎牛血【xuè】清【qīng】(United States，GIBCO)，10%;双抗 1%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3. 冻【dòng】存液：90%血清，10%DMSO，现【xiàn】用现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏【sū】细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的【de】冻存【cún】管【guǎn】在【zài】37°C水浴【yù】中【zhōng】迅速摇晃【huǎng】解冻【dòng】，加入4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过夜（或将【jiāng】细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第【dì】二天换液并检 查细胞密度。
2.细【xì】胞传【chuán】代【dài】：如果【guǒ】细胞密度达80%-90%，即【jí】可进行传代培养。
 
人髙转移肝癌细胞(HCCLM3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙、镁离子的【de】PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中【zhōng】消化9-22分钟，然后在【zài】显【xiǎn】微【wēi】镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿【ná】回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培养基终止 消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻轻打匀后【hòu】吸【xī】出，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃【qì】去【qù】上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养液后吹匀【yún】。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中或【huò】者 瓶中。
 
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃【qì】去培【péi】养【yǎng】基后【hòu】，PBS清【qīng】洗瓶底9-22次后加入【rù】lml胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加入【rù】2ml*培养基终止消化，可【kě】使用血球计数板计数【shù】。1000RPM离心5分钟去【qù】掉上【shàng】清。用血清重悬【xuán】浮，加【jiā】DMSO至终浓【nóng】度为 10%。加入【rù】DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分【fèn】配【pèi】到冻存管中，注【zhù】意冻存 管做好标识【shí】。本公司【sī】按每个冻存管细胞数目大于1X106个【gè】细胞冻存。
将冻存管置【zhì】于程序降温盒中，放入-80度冰【bīng】箱【xiāng】，至少【shǎo】2个小时以【yǐ】后转入液氮【dàn】灌储存。记录冻存管位置【zhì】以【yǐ】便下【xià】次拿取。
 
注意事项：
收到【dào】细胞【bāo】后，若发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞【bāo】有【yǒu】污染，请立即与我们【men】电联【lián】。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物【wù】危害性，必须在二【èr】级生【shēng】物安全台内操作，并请【qǐng】注意防【fáng】护，所有废液及【jí】接触过此细【xì】胞的器【qì】皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样，胞质内有颗粒
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人髙转移肝癌细胞(HCCLM3)运【yùn】输和保存：可选【xuǎn】择干冰运【yùn】输及发送复【fù】苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后 立即转入液氮冻存或【huò】直【zhí】接【jiē】复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好时，再【zài】进行冻存。具体【tǐ】操作见细【xì】胞【bāo】培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。