人喉癌细胞 （TU 686）

人喉癌细胞 (TU 686)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛血清，10%。
2.培养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37°C，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的【de】冻存管【guǎn】迅速【sù】放入37°C水浴中（水面要低于【yú】冻存管盖部）摇晃解冻【dòng】，移入事先【xiān】准备好【hǎo】的含有【yǒu】4mL培养基【jī】的15ml离心【xīn】管中混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清液【yè】，加入lmL培 养【yǎng】基后吹匀。然后将所有细胞【bāo】悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。 第二【èr】天换液并检【jiǎn】查【chá】细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人喉癌细胞 (TU 686)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下【xià】观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加【jiā】入3ml此【cǐ】细胞的培养基终止消【xiāo】化。轻轻【qīng】吹打后吸出，移入15ml离【lí】心【xīn】管中，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】， 弃去上清液，加【jiā】入lmL培养【yǎng】液后吹匀。移入到【dào】事先准备【bèi】好的含有5ml培【péi】养基的T-25培养瓶中或含【hán】有14ml培【péi】养【yǎng】基的T-75培养瓶中培养。
 
细胞【bāo】冻存：待细胞【bāo】生长状态良好【hǎo】时，可进行细【xì】胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻【dòng】存时，先要【yào】消化处【chù】理并进行【háng】细胞计数。消【xiāo】化方法按照细胞传代方法的【de】9-21步骤进【jìn】行，后的【de】重悬液使用血清。悬浮细【xì】胞直接计数后【hòu】离心【xīn】，用血【xuè】清【qīng】重悬浮【fú】，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每【měi】lml的【de】数量分配到冻存管中【zhōng】。本公司按每个冻存管【guǎn】细胞数【shù】目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现【xiàn】干【gàn】冰己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污染，请立即【jí】与我们电联。
所【suǒ】有动【dòng】物细胞均视【shì】为【wéi】有潜在的生物危害性，必须在二级生物安【ān】全台内操作，并【bìng】请【qǐng】注【zhù】意防护，所有废液及接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：喉部
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人喉癌细胞 (TU 686)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在【zài】显【xiǎn】微镜下【xià】确【què】认细胞生长状态，去掉封口膜【mó】并将T25瓶置于37°C培养约【yuē】 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细胞长满（90%以上）请及【jí】时进行细胞【bāo】传代，传代培养【yǎng】用6ml本公司附带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检【jiǎn】查【chá】细胞【bāo】是否污染，若发【fā】现【xiàn】污染或疑似污染，请【qǐng】及时与【yǔ】我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。