人髓样甲状腺肿瘤细胞 （TT）

人髓样甲状腺肿瘤细胞 (TT)
细胞介绍：
TT细胞由LeongSS等，自【zì】一位77岁白人女性甲【jiǎ】状【zhuàng】腺【xiàn】髓样癌患者【zhě】的穿刺活检样本【běn】中建立【lì】。TT细胞持续产生高水平的降血钙【gài】素【sù】和CEA。更换培养基后24h和72h，在培养【yǎng】基中【zhōng】检测【cè】到的免【miǎn】疫【yì】活【huó】性的降血钙素浓度分别为【wéi】3900 pg/106个【gè】细胞【bāo】和7700 pg/106个细胞。72小【xiǎo】时后CEA积累浓度超过27 ng/106个细胞。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F12K培养【yǎng】基(F12K，GIBC0)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度：37°C，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管【guǎn】迅【xùn】速放入37°C水浴中（水面【miàn】要低于【yú】冻存管盖部【bù】）摇晃解冻，移入事先【xiān】准备好【hǎo】的含有4mL培养【yǎng】基【jī】的15ml离心 管中混合【hé】均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，加【jiā】入lmL培养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液移入【rù】含有5ml培养基的培养瓶【píng】中培养过夜【yè】。第二天换【huàn】液并检查细【xì】胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人髓样甲状腺肿瘤细胞 (TT)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培【péi】养【yǎng】上清【qīng】，用不含【hán】钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-21分钟，然【rán】后在显微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶【píng】后【hòu】加入3ml此细胞的培养【yǎng】基终止消化。轻轻吹打后【hòu】吸出，移【yí】入15ml离【lí】心管【guǎn】中，在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清【qīng】液【yè】，加入lmL培养液后吹匀。移入到【dào】事先准备好的【de】含有5ml培养基【jī】的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培【péi】养。
 
细胞冻存：待细胞生【shēng】长状态良好时，可进行细【xì】胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先【xiān】要【yào】消【xiāo】化处理并进【jìn】行【háng】细胞计数。消化方法按照细胞【bāo】传代【dài】方法【fǎ】的9-21步骤进行，后的重悬液使用血清。悬浮细胞【bāo】直接计数后【hòu】离心，用【yòng】血【xuè】清重悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为10%。加入DMSO后迅【xùn】速混【hún】匀，按每lml的数量分【fèn】配到冻【dòng】存【cún】管中。本公司按每个【gè】冻【dòng】存【cún】管细胞数目【mù】大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干【gàn】冰【bīng】己挥发干净、冻【dòng】存管【guǎn】瓶盖脱落、破【pò】损及细胞有【yǒu】污染【rǎn】，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视【shì】为【wéi】有潜在的生物危【wēi】害【hài】性，必须在二【èr】级【jí】生物【wù】安全台内【nèi】操作，并请注意防护，所有废【fèi】液【yè】及接触过【guò】此细胞的器皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。
细胞特性：
1)来源：甲状腺
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人髓样甲状腺肿瘤细胞 (TT)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微【wēi】镜【jìng】下确认细胞生长状【zhuàng】态，去【qù】掉封【fēng】口膜【mó】并将T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细【xì】胞长满【mǎn】（90%以上）请及【jí】时进【jìn】行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的*培【péi】养基。
5.接到细【xì】胞次日，请检查细胞是否污染，若【ruò】发【fā】现污染或疑似污染，请及【jí】时【shí】与我们取得【dé】电联。
细胞用途：仅供使用。