人胚肺细胞 （WI-38）

人胚肺细胞 (WI-38)
细胞介绍：
WI-38人二倍体细【xì】胞系来【lái】自3个【gè】月的正常【cháng】胚胎肺组【zǔ】织。该细胞系是首株用于人【rén】类疫苗【miáo】制备的人二【èr】倍体细胞系。培养液中添加TNFalpha可【kě】以【yǐ】促进【jìn】细胞【bāo】生长。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM 培养基【jī】(MEM:GIBCO);北美胎牛血清【qīng】(United States， GIBCO )，10%; PS 1%。

2.培【péi】养条件【jiàn】：气【qì】相：空气，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度：37摄氏【shì】度，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现【xiàn】用现【xiàn】配【pèi】。液氮【dàn】储存。z〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二【èr】天换液并【bìng】检查细胞密度。
2.细【xì】胞【bāo】传代：如果细胞密度达80%-90%，即可【kě】进行传代培养。
 
人胚肺细胞 (WI-38)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力口【kǒu】2m丨【shù】消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后在显【xiǎn】微镜下观【guān】察细【xì】胞消化【huà】情况【kuàng】，若【ruò】细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下【xià】培【péi】养瓶后加2ml*培养基 终止消【xiāo】化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻【qīng】打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养【yǎng】基后吹匀【yún】。将细【xì】胞悬液按1: 2到1: 5的比例【lì】分到新【xīn】的含【hán】8ml培养【yǎng】基的新皿中或者瓶中。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞【bāo】冻存时，弃去培养【yǎng】基后，PBS清洗瓶底9-21次后加入lml胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用【yòng】血【xuè】球计数【shù】板计数。1000RPM离【lí】心5分【fèn】钟去【qù】掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终【zhōng】浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按【àn】每lml的【de】数【shù】量分配【pèi】到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公【gōng】司按【àn】每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。将冻存【cún】管置【zhì】于程【chéng】序【xù】降温盒中，放入-80度【dù】冰箱，至少2个小时以【yǐ】后转【zhuǎn】入液氮灌储【chǔ】存。记【jì】录冻存管【guǎn】位置以便下【xià】次拿【ná】取【qǔ】。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己挥发干净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖【gài】脱【tuō】落、破损【sǔn】及细胞有污染，请立即与【yǔ】我【wǒ】们电联。
所【suǒ】有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害【hài】性，必【bì】须在二【èr】级生物安全台【tái】内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液【yè】及接触过【guò】此细胞的器【qì】皿需要灭【miè】菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：正常肺
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺细胞 (WI-38)运输和保存：使用含【hán】有胎牛【niú】血清的2ml冻【dòng】存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温【wēn】条件下【xià】，离心5min后，于【yú】洁净操作台弃去上清，加入推【tuī】荐使用【yòng】的培养【yǎng】基后转【zhuǎn】移至l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培养【yǎng】，传代达到【dào】细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态【tài】良好时，再进行【háng】冻存。具体操【cāo】作见细胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。