人食管癌细胞（TE-5）

人食管癌细胞(TE-5)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37°C，培养箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速【sù】放入37°C水浴中（水面要低于【yú】冻存【cún】管盖部）摇晃解冻，移【yí】入事【shì】先准备【bèi】好的含有4mL培养基【jī】的15ml离心管中混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，加【jiā】入lmL培养基【jī】后吹【chuī】匀。然【rán】后【hòu】将【jiāng】所【suǒ】有细胞【bāo】悬【xuán】液【yè】移入含有5ml培养基的培养瓶中【zhōng】培养过夜。第二天换液【yè】并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人食管癌细胞(TE-5)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子【zǐ】的【de】PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化【huà】9-21分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况【kuàng】，若细胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加【jiā】入3ml此细【xì】胞【bāo】的培养基终【zhōng】止消化。轻轻吹【chuī】打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培养【yǎng】液后吹【chuī】匀。移入到事先【xiān】准备【bèi】好的含有5ml培养基【jī】的T-25培养瓶中【zhōng】或含有14ml培养【yǎng】基【jī】的T-75培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养。
 
细胞冻存：待细胞生长状态【tài】良好时，可进【jìn】行细【xì】胞【bāo】冻存【cún】。贴壁细【xì】胞冻存时，先要消化【huà】处理并进行细胞计数。消化方法按【àn】照细胞传代方法的9-21步骤进【jìn】行【háng】，后的重悬液使【shǐ】用血清【qīng】。悬浮细【xì】胞【bāo】直接计【jì】数后离心【xīn】，用血清【qīng】重悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的数量分配【pèi】到冻存管【guǎn】中。本公司按【àn】每个冻存管细【xì】胞数目大于1X106个细胞【bāo】冻存。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发【fā】现干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细胞【bāo】有污染，请【qǐng】立即与我【wǒ】们电联。
所有动【dòng】物细胞均视【shì】为有【yǒu】潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级【jí】生【shēng】物安全台【tái】内操作，并【bìng】请注【zhù】意防护，所有废液及接触过此【cǐ】细【xì】胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：食管癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人食管癌细胞(TE-5)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请【qǐng】先在显微镜下确【què】认细胞生长【zhǎng】状态，去掉封口【kǒu】膜并将【jiāng】T25瓶置于37°C培养约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以【yǐ】上【shàng】）请及时【shí】进行细胞传【chuán】代，传【chuán】代培养用6ml本【běn】公司【sī】附带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检查【chá】细【xì】胞【bāo】是否【fǒu】污染，若发现污染【rǎn】或疑似污染，请及时与我们【men】取得电联。
细胞用途：仅供使用。