人结肠癌氟尿嚼陡耐药株 （HCT-8/FU）

人结肠癌氟尿嚼陡耐药株 (HCT-8/FU)
细胞介绍：
这是一株耐药细胞株。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
注意：客户【hù】收到细胞后【hòu】按照【zhào】下【xià】面的要求操【cāo】作：培养【yǎng】瓶里【lǐ】面的培养液是不含【hán】药物的。待细胞长【zhǎng】到9-22%的汇【huì】合度【dù】时，去掉【diào】培养液，加入【rù】含8000ng/mlFU药【yào】物的培养液【yè】，放【fàng】入培养箱，这段时【shí】间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是【shì】不要紧【jǐn】， 通过换液可以去掉，下面【miàn】的细胞待长满就【jiù】可以【yǐ】消化【huà】传瓶了，这【zhè】时可以一直【zhí】用含 药培养液【yè】来消化培养细胞，一两代【dài】之后可以将药物浓度【dù】提髙到15000ng/ml,含 药培养液用于【yú】细【xì】胞培养都没问题的，冻存的时候【hòu】就不【bú】要在冻【dòng】存液里【lǐ】面加【jiā】药物了。
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清【qīng】，10%，添【tiān】加1%双 抗【kàng】，15000ng/ml氟尿喃啶。
2.培养【yǎng】条件【jiàn】：气相【xiàng】：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱 湿度为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加 入4mL培【péi】养【yǎng】基混合均【jun1】匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中【zhōng】培养【yǎng】过【guò】夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培【péi】养基，培【péi】养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠癌氟尿嚼陡耐药株 (HCT-8/FU)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-22次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然【rán】后【hòu】在显【xiǎn】微【wēi】镜下观察【chá】细胞消化情【qíng】况，若细胞大部 分变【biàn】圆并【bìng】脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培【péi】养【yǎng】基【jī】终止【zhǐ】消化。按【àn】6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻打【dǎ】匀【yún】后【hòu】吸出【chū】，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
细胞冻存：待【dài】细胞生【shēng】长状态良好时，可进【jìn】行细胞冻存【cún】。贴壁细胞冻【dòng】存时，弃去培养基后【hòu】加入少量【liàng】胰酶，细【xì】胞变圆脱落后，加入【rù】约lml含血【xuè】清【qīng】的培养【yǎng】基后加入冻存管中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后，若发现【xiàn】干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请立即与我们电【diàn】联【lián】。
所有动【dòng】物细【xì】胞均【jun1】视为【wéi】有潜【qián】在的生物危害性，必须在【zài】二级【jí】生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及接触过此细【xì】胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能【néng】丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：人结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠癌氟尿嚼陡耐药株 (HCT-8/FU)运【yùn】输和保存【cún】：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到【dào】后 立【lì】即转【zhuǎn】入液氮冻存【cún】或【huò】直接复苏；（2)存活细胞，收【shōu】到【dào】后应继续【xù】生长【zhǎng】，传代达【dá】到细胞生长状【zhuàng】态【tài】良好时，再进行冻存。具体【tǐ】操作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。