人结肠癌紫杉醇耐药株 （HCT-8/Taxol）

人结肠癌紫杉醇耐药株 (HCT-8/Taxol)
细胞介绍：
这是一株耐药细胞株。
 胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
注意【yì】：客户收到【dào】细胞后【hòu】按【àn】照下面的【de】要求操作：培养【yǎng】瓶里【lǐ】面的培养【yǎng】液是【shì】不【bú】含药物的。待细胞【bāo】长【zhǎng】到9-22%的汇合【hé】度时，去掉培【péi】养液，加入含500ng/mlTaxo丨药物 的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧， 通【tōng】过换【huàn】液【yè】可以去【qù】掉，下面的【de】细胞待长满【mǎn】就可以消化【huà】传瓶【píng】了，这【zhè】时可以一直用含 药培养【yǎng】液来【lái】消化培养【yǎng】细胞，一两【liǎng】代之后可以将药物浓度提髙到l〇〇〇ng/ml，含 药培【péi】养液【yè】用于细【xì】胞培养都没问题的，冻【dòng】存的【de】时候就不要在冻存液里面加【jiā】药物了。
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC031.5g八【bā】, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸【suān】钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%，添【tiān】加PS，1%, Taxol000ng/ml〇
2.培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞【bāo】：将含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，补 加【jiā】l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将【jiāng】所【suǒ】有细胞悬【xuán】液加入培养【yǎng】瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜【yè】）。第二天换液并检查细胞密【mì】度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠癌紫杉醇耐药株 (HCT-8/Taxol)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的【de】PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于【yú】37°C培【péi】养箱中消化9-22分钟，然后【hòu】在显微镜【jìng】下观察细【xì】胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大【dà】部【bù】分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶后加少量培养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻【qīng】轻打【dǎ】匀后【hòu】吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】液后【hòu】吹匀。将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
3)细胞冻存：待细【xì】胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁细胞冻存时，弃【qì】 去【qù】培【péi】养【yǎng】基后加入少量胰【yí】酶，细胞变【biàn】圆【yuán】脱落后，加入【rù】约lml含血清的培养基后 加入【rù】冻存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现【xiàn】干【gàn】冰【bīng】己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落、破【pò】损及细【xì】胞有【yǒu】污染，请立即与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞【bāo】均视为【wéi】有【yǒu】潜在的生物【wù】危害性，必须【xū】在二【èr】级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及【jí】接触【chù】过此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：人结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠癌紫杉醇耐药株 (HCT-8/Taxol)运【yùn】输【shū】和保存：可选择【zé】干冰【bīng】运输及【jí】发送复苏存活细胞方式【shì】：（1)干冰运输，收到后立【lì】即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存【cún】活细胞，收到后应继续生长【zhǎng】，传代达到细胞生【shēng】长状【zhuàng】态【tài】良好时【shí】，再进行【háng】冻存。具【jù】体操作见细胞培【péi】养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。