人结直肠腺癌细胞（HCT-8）

人结直肠腺癌细胞(HCT-8)
细胞介绍：
HCT-8与【yǔ】HRT-18是一【yī】样的。角蛋白免疫过氧【yǎng】化物酶染色阳性。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄【táo】糖2.5g八【bā】，丙酮酸钠【nà】O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培【péi】养条件：气【qì】相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去上清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培【péi】养基后吹匀【yún】。然后将所有【yǒu】细胞悬液加入培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将 细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入【rù】约8ml培养基，培养过夜【yè】）。第二【èr】天换液并检【jiǎn】查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结直肠腺癌细胞(HCT-8)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-22次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化【huà】9-22分【fèn】钟，然【rán】后在显微【wēi】镜下观察【chá】细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并【bìng】脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基【jī】终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液【yè】后【hòu】吹匀【yún】。将细【xì】胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的【de】比例分到新的含8ml培养基的【de】新皿中【zhōng】或者瓶中【zhōng】。
 
3)细【xì】胞冻存：待细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞【bāo】冻存。贴壁【bì】细胞【bāo】冻存【cún】时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱【tuō】落后，加入约lml含血【xuè】清的培养基后加【jiā】入冻【dòng】存管中，再添加1〇%DMSO后进【jìn】行【háng】冻存【cún】。
 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶【píng】盖脱落【luò】、破【pò】损及细【xì】胞有污染，请立即与我们电联。
所有【yǒu】动物细胞均视为【wéi】有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内【nèi】操作，并请注意防【fáng】护，所有废液及【jí】接触【chù】过【guò】此细胞的器皿【mǐn】需【xū】要灭菌后【hòu】方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：结肠
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(HCT-8)运输和保存：可选【xuǎn】择干冰【bīng】运【yùn】输及【jí】发送复苏存活细胞方式：（1)干【gàn】冰运输，收到后立即【jí】转入液氮冻存或直接【jiē】复苏；（2)存活细胞【bāo】，收到【dào】后【hòu】应继续生长，传代达到【dào】细【xì】胞生【shēng】长状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作【zuò】见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。