人结直肠腺癌细胞（HCT-15）

人结直肠腺癌细胞(HCT-15)
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基（RPMI-1640，GIBCO，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37°C，培【péi】养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入【rù】37°C水浴中（水【shuǐ】面要【yào】低【dī】于冻存管【guǎn】盖部）摇【yáo】晃解冻【dòng】，移入事先【xiān】准备好【hǎo】的【de】含【hán】有4mL培【péi】养基【jī】的15ml离心 管【guǎn】中混合均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去【qù】上清液，加入lmL培 养基后吹匀。然后将所有细胞悬【xuán】液【yè】移入含有5ml培养基【jī】的培养瓶中培养过【guò】夜。第二【èr】天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结直肠腺癌细胞(HCT-15)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙【gài】、镁离子【zǐ】的PBS润【rùn】洗细【xì】胞9-22次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中【zhōng】，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-22分钟，然后在显微镜下观察【chá】细胞消化情况，若细胞【bāo】大部【bù】分【fèn】变圆并脱【tuō】落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的 培养【yǎng】基终止消【xiāo】化。轻轻【qīng】吹打【dǎ】后吸出，移入15ml离心管【guǎn】中【zhōng】，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟， 弃去上清液，加入lmL培养液后【hòu】吹匀。移入到【dào】事先【xiān】准备好【hǎo】的含有5ml培养基【jī】的T-25培养瓶中或【huò】含有14ml培养 基的T-75培养瓶中培【péi】养。
 
细胞冻存：待细胞生长状态【tài】良【liáng】好时【shí】，可【kě】进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数【shù】。消化【huà】方法【fǎ】按照细【xì】胞传代【dài】方法【fǎ】的9-22步骤进行，后的重悬【xuán】液使用【yòng】血【xuè】清【qīng】。悬浮细【xì】胞【bāo】直接计【jì】数后离心，用血清重悬浮，加DMSO 至终浓度【dù】为10%。加【jiā】入DMSO后迅速混匀，按每【měi】lml的数量分【fèn】配【pèi】到【dào】冻存管中。本公司按【àn】每个冻存管细胞数目大于【yú】1X106个细胞【bāo】冻存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后【hòu】，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有【yǒu】污染，请立即与我【wǒ】们电联【lián】。
所有动物细胞【bāo】均视为【wéi】有【yǒu】潜在的生物危害性，必【bì】须在二【èr】级生【shēng】物安【ān】全台内操【cāo】作，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此【cǐ】细胞的【de】器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：结直肠腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结直肠腺癌细胞(HCT-15)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在【zài】显微镜下确认【rèn】细胞生长【zhǎng】状态，去掉封口膜并【bìng】将T25瓶置于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长满（90%以【yǐ】上）请及时进行细胞传【chuán】代，传代培养用6ml本公司附【fù】带的*培养基【jī】。
5.接到细胞次日【rì】，请检查细胞是否污【wū】染，若【ruò】发现污染【rǎn】或疑似污【wū】染，请及时【shí】与我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。