人结肠癌细胞（HCT 116）

人结肠癌细胞(HCT 116)
细胞介绍：
HCT116是【shì】1979年【nián】M.Brattain等【děng】从患结肠癌【ái】的男性病人中分离的【de】三【sān】株恶性【xìng】细胞【bāo】之 一。在半固体琼脂糖培养基中【zhōng】形成克隆。HCT116在无胸腺【xiàn】的【de】裸鼠有致瘤性，形成上皮样的【de】肿瘤。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 McCoy's 5A 培养基【jī】(McCoy's 5A，GIBCO;北美胎牛血【xuè】清，10%;双抗1%。
2.培养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养箱 湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养【yǎng】基后吹匀。然【rán】后将所有【yǒu】细胞【bāo】悬液加入培【péi】养瓶中培养过夜（或将细胞【bāo】悬液【yè】加入l〇cm皿中，加【jiā】入【rù】约8ml培养【yǎng】基【jī】，培养过夜【yè】）。第二【èr】天换液并检查细胞密度。
2.细【xì】胞传代【dài】：如果细【xì】胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠癌细胞(HCT 116)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗【xǐ】细【xì】胞9-22次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟【zhōng】，然后在【zài】显微镜【jìng】下观察细【xì】胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆【yuán】并脱落，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出【chū】，在【zài】1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培养基的新【xīn】皿【mǐn】中或者 瓶中。
 
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞【bāo】冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-22次后【hòu】加入lml胰酶【méi】，细胞【bāo】变圆脱落后，加【jiā】入2ml*培【péi】养基终止消化，可使用血球计【jì】数板计数。1000RPM离【lí】心5分钟去【qù】掉上清。用血清【qīng】重悬浮【fú】，加DMSO至【zhì】终浓【nóng】度为10%。加【jiā】入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻【dòng】存【cún】管中，注意冻【dòng】存 管做好标【biāo】识。本公司按【àn】每个【gè】冻存管细胞数目【mù】大于1X106个细胞【bāo】冻存。将冻存管置于程序降温盒【hé】中，放入-80度冰箱，至【zhì】少2个【gè】小时【shí】以后转入液【yè】氮灌储存。记录冻存管【guǎn】位置以便下次拿取【qǔ】。
 
注意事项：
收到【dào】细【xì】胞后【hòu】，若发现【xiàn】干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染，请立即与我们电联。
所有动【dòng】物【wù】细胞均视为有潜在的生【shēng】物危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内【nèi】操作，并请【qǐng】注意防护，所有【yǒu】废液及接触【chù】过【guò】此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌【jun1】后方能【néng】丢弃。
  
细胞特性：
1)来源：结直肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人结肠癌细胞(HCT 116)运输和保存：可选【xuǎn】择干【gàn】冰运输【shū】及发【fā】送复苏存活【huó】细【xì】胞方式：（1)干冰运【yùn】输【shū】，收到后【hòu】立即转入液【yè】氮冻存或直接复苏【sū】；（2)存活细胞，收到后应继续生长【zhǎng】，传【chuán】代达到细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见细胞【bāo】培养步骤。
细胞用途：仅供使用。