中国仓鼠卵巢细胞（CHO/DHFR）

中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)
细胞介绍
该细胞【bāo】为二氢叶酸还原酶缺陷细胞【bāo】。在没有【yǒu】HT (胸腺嘧啶）时细胞【bāo】会死亡。细胞培液中加氨甲【jiǎ】喋【dié】呤可以防止对药物低抗【kàng】性的【de】回变细胞的生长【zhǎng】。
 
细胞特性
1)来源：中国仓鼠
2)形态：贴壁生长时，呈上皮细胞样。
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规【guī】格【gé】：T25瓶或者lmL冻存【cún】管包装运输【shū】和保存【cún】：可【kě】选择干【gàn】冰运输及发【fā】送复苏存活细【xì】胞方式：（1)干冰运输，收【shōu】到后立即转入液【yè】氮冻存【cún】或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传【chuán】代达到细胞生长状态良好时【shí】，再进行【háng】冻存。具体操作见细胞培养步骤。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备IMDM培养基(GIBCO);胎【tāi】牛血【xuè】清，15%，双【shuāng】抗1%;用于表达蛋白【bái】时，也可使用【yòng】悬浮培养基，使细【xì】胞悬浮【fú】生长。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化【huà】碳，5%。温度：37摄【shè】氏度，培养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
1.复苏细胞【bāo】：将含【hán】有lmL细胞悬液【yè】的冻存管在37°C水浴中迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻，加【jiā】入【rù】4mL培养【yǎng】基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后【hòu】吹【chuī】匀。然后将【jiāng】所有细胞悬液加【jiā】入培养瓶中培养过【guò】夜（或将
细【xì】胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养【yǎng】基，培养【yǎng】过夜【yè】）。第二天【tiān】换液并检查细胞密度。
2.细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即【jí】可【kě】进行传【chuán】代培养。对于贴壁细胞，传代可参【cān】考以【yǐ】下方法：弃【qì】去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-20次。力口【kǒu】 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-20分钟，然后在【zài】显微镜下【xià】观察细胞消化【huà】情况【kuàng】，若细胞【bāo】大部分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速拿回操【cāo】作台，轻【qīng】敲几下培养瓶后加少量培养基终止按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀后【hòu】吸【xī】出，在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹【chuī】匀【yún】。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基的新皿中或者【zhě】瓶【píng】中【zhōng】。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底【dǐ】9-20次后加入lml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml*培养基【jī】终【zhōng】止消【xiāo】化，可使【shǐ】用血球计数板计数。1000RPM离心5分钟【zhōng】去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终【zhōng】浓度为10%。加【jiā】入【rù】DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的【de】数量分配到冻存【cún】管中，注【zhù】意冻管做好标识。本公【gōng】司按【àn】每个冻存【cún】管细胞数目大于1X106个【gè】细胞【bāo】冻存。将冻【dòng】存管【guǎn】置于程【chéng】序降【jiàng】温盒中，放入-80度冰箱，至少【shǎo】2个小时以【yǐ】后转入液氮灌储存。记【jì】录冻存管位置以便下次拿【ná】取。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CHO/DHFR)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己挥【huī】发【fā】干净【jìng】、冻存管【guǎn】瓶【píng】盖脱落、破【pò】损及细胞有污染，请立即与我们电联【lián】。
所【suǒ】有动物细胞均视为有【yǒu】潜在的生物【wù】危害性，必须在二【èr】级生【shēng】物安全台内操作，并请注意防【fáng】护，所有废【fèi】液及接触过此细【xì】胞的器皿【mǐn】需要灭菌【jun1】后【hòu】方【fāng】能丢弃。