鸡淋巴瘤细胞（DT40）

鸡淋巴瘤细胞(DT40)
细胞介绍
DT40是来自HylineSC鸡法【fǎ】氏囊淋巴细胞株经鸟类【lèi】白【bái】血病病毒诱导建【jiàn】株的。原始淋巴瘤用【yòng】罗氏相关病【bìng】毒l(RAV-l)感染出【chū】生1天的小鸡得到。法氏囊中的肿瘤【liú】制成【chéng】细胞悬液后通过【guò】静脉注射输入同基因型【xíng】的受体小鸡。经过【guò】一次【cì】体内移植后，建立了 DT40细【xì】胞株。这【zhè】株细胞包含【hán】的前病毒基因【yīn】整合在c-myc原癌基因的上游【yóu】，表达的c-myc RNA水【shuǐ】平较【jiào】高【gāo】。它【tā】缺少一个正常c-myc基因，但【dàn】含有两【liǎng】个拷贝ALV去【qù】调【diào】控的myc基因【yīn】。这株细胞保【bǎo】留了重排免疫球蛋白轻链基因(IgL)的能力。在IgL位【wèi】点【diǎn】，DT40包含一个重【chóng】排和一个胚系同源【yuán】基因。c-rel基因和【hé】v-rel癌基因在DT40细胞株【zhū】中【zhōng】都能诱【yòu】导组织相容性(MHC)II类抗原表【biǎo】达。v-rel诱导【dǎo】的MHCII表达比【bǐ】c-rel诱导快，且其有【yǒu】效性【xìng】在数周后达到crel的50倍。这株细胞【bāo】呈【chéng】淋巴母细胞【bāo】表型。传染性【xìng】检测【cè】表明DT40释放【fàng】低水平的传染性【xìng】RAV-1。这株【zhū】细胞可以用于稳转研究。
 
细胞特性
1)来源：鸡淋巴瘤
2)形态：淋巴母细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格【gé】：T25瓶或者lmL冻存管包装运输和【hé】保存：使用含有胎牛血清【qīng】的2ml冻【dòng】存管发送存【cún】活【huó】细胞【bāo】。收到细胞【bāo】后【hòu】，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于洁净操作台弃【qì】去【qù】上清，加入推荐【jiàn】使用的培养基后转移至l〇cm培养或者【zhě】T25培养【yǎng】瓶中培养，传【chuán】代达到细胞生长状态良好时，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见细胞培【péi】养步骤【zhòu】。
 
鸡淋巴瘤细胞(DT40)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1. 准备 DMEM 培养基(DMEM，GIBCO)，85%;胎牛【niú】血清，10%，鸡血清，5%。
2. 培养【yǎng】条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解【jiě】冻，加【jiā】入4mL培【péi】养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补【bǔ】加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后【hòu】将所有细胞【bāo】悬液加入培养瓶中培养【yǎng】过夜（或【huò】将细胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培【péi】养【yǎng】基【jī】，培养【yǎng】过【guò】夜【yè】）。第二【èr】天换液并检查细胞密度。细胞传代【dài】：如果细胞密【mì】度达80%-90%，即可进【jìn】行传【chuán】代培养。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一【yī】：收集细胞，1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的【de】含8ml培养【yǎng】基【jī】的新皿中【zhōng】或者瓶中。
方法二：可【kě】选择半数换液方式，弃去半数培【péi】养基后【hòu】，将剩余细胞悬起，将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 3的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。细胞冻存：待细胞【bāo】生长【zhǎng】状态良好时，可进【jìn】行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收【shōu】集，1000RPM条件【jiàn】下【xià】离【lí】心4分钟，少量保存上【shàng】清液（防止细【xì】胞吸走【zǒu】)，入部分新鲜培养【yǎng】基，加入到冻存管中【zhōng】，在冻【dòng】存管【guǎn】中【zhōng】加【jiā】入10%DMSO后【hòu】进行【háng】冻【dòng】存。
 
鸡淋巴瘤细胞(DT40)注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干净、冻存管瓶盖【gài】脱【tuō】落、破【pò】损及细胞有污染，请立【lì】即与我们电联【lián】。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的生【shēng】物危【wēi】害性，必须【xū】在二级生物【wù】安【ān】全台内【nèi】操【cāo】作，并【bìng】请注意防护，所有废液及接触过此细胞的【de】器皿需要【yào】灭菌后方【fāng】能丢弃。