人卵巢透明细胞癌（ES-2）

人卵巢透明细胞癌(ES-2)
细胞介绍：
ES-2细胞【bāo】系【xì】建自【zì】45岁女【nǚ】性黑人的外科肿瘤【liú】标本。该肿瘤为【wéi】低【dī】分【fèn】化卵巢透【tòu】明细胞癌。该细胞初生长在软琼脂中。在裸鼠【shǔ】中成瘤。该细胞对多种化【huà】疗药物包括 doxorubicin, cisplatin, carmustine, etoposide 和 cyanomorpholinodoxorubicin (MRA-CN)表现出低到中【zhōng】等的【de】耐受【shòu】性。ES-2细胞表达低水平的P糖【táng】蛋白。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 McCoy，s 5A 培养基【jī】((McCoy，s 5A Media,SIGMA,M4892，添加 NaHC03 2.2g/L)，90%;胎牛【niú】血【xuè】清，10%。
2. 培养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱 湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存管【guǎn】在37°C水浴【yù】中迅速摇晃解冻，加 入4mL培【péi】养基【jī】混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹【chuī】匀。然【rán】后将所有【yǒu】细胞悬液【yè】加入培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基【jī】，培【péi】养【yǎng】过夜）。第二天【tiān】换液【yè】并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人卵巢透明细胞癌(ES-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含【hán】钙【gài】、镁离子的【de】PBS润洗细胞9-23次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培【péi】养【yǎng】箱中消化9-23分【fèn】钟【zhōng】，然【rán】后在显微镜下观察【chá】细胞消化情【qíng】况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速【sù】拿回【huí】操【cāo】作台，轻【qīng】敲【qiāo】几下培养瓶后加【jiā】少【shǎo】量培养基终止【zhǐ】 消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后【hòu】吸【xī】出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基【jī】的新皿【mǐn】中【zhōng】或者瓶中。
细胞冻存：待【dài】细【xì】胞生长状【zhuàng】态良【liáng】好时，可进【jìn】行【háng】细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻【dòng】存【cún】时，弃 去培养基【jī】后加入少量胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加【jiā】入【rù】约lml含血清的培【péi】养基后 加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染【rǎn】，请立即与【yǔ】我们电联。
所【suǒ】有动【dòng】物【wù】细胞均视【shì】为有【yǒu】潜在的生物危害性，必【bì】须在二级【jí】生【shēng】物安【ān】全台内【nèi】操作，并请注【zhù】意防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

细胞特性：
1)来源：透明细胞癌，卵巢
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人卵巢透明细胞癌(ES-2)运输和保【bǎo】存：可选择干冰运【yùn】输及发送【sòng】复苏存活细胞方式【shì】：（1)干【gàn】冰运输，收到后立即转入液【yè】氮冻存或直接复【fù】苏；（2)存活细胞，收到后应【yīng】继【jì】续生长，传代达【dá】到细胞生长状态【tài】良好时【shí】，再进行【háng】冻存【cún】。具体操作【zuò】见细胞培养步【bù】骤。
细胞用途：仅供使用。