中国仓鼠卵巢细胞（CTLA4 Ig-24）

中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)
细胞介绍
CHO 细胞以人 CTLA-4 基因细胞【bāo】外结构域序列【liè】和【hé】人 IgCgamma1 的绞链区，CH2 和CH#区【qū】序列的融合【hé】结构转【zhuǎn】染，构建了这株【zhū】细胞【bāo】。它们表达融合蛋白【bái】(CTLA4Ig)。
 
细胞特性
1）来源：中国仓鼠卵巢
2）形态 ：可贴壁生长（上皮细胞样），也可悬浮生长（圆球形）
3）含量：>1x10 6 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规【guī】格：T25 瓶或【huò】者 1mL 冻存管【guǎn】包装运输和保存：使用含有胎牛血清的 2ml 冻存管发送【sòng】存活细胞。收到细【xì】胞后，可【kě】在 1000RPM，常温【wēn】条件下，离心 5min 后，于洁【jié】净操作【zuò】台【tái】弃【qì】去上清【qīng】，加入推荐使用的培【péi】养基后至10cm 培养皿或者 T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生【shēng】长状态良【liáng】好时【shí】，再进行冻【dòng】存。具体操【cāo】作见细胞培养【yǎng】步【bù】骤。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
培养条件：贴壁生【shēng】长时，选择 DMEM-H 培养基【jī】(DMEM-H:GIBCO,添加 NaHCO3 1.5g/L, 添加【jiā】 0.2 mM 脯【pú】氨酸,0.001 mM 氨甲蝶呤)，90%；胎牛【niú】血清，10%。[MTX 是基因 DHFR 产物的抑制物。当培养基【jī】中存MTX 时，MTX 可渗入细【xì】胞【bāo】内与 DHFR 蛋【dàn】白【bái】结合，使【shǐ】核苷酸【suān】的合成受阻。但是【shì】 DHFR 基因【yīn】连【lián】同其附近【jìn】几千 KB的 DNA 还会扩增以满足核苷酸合成的需要。理论上 MTX 浓度【dù】越大，DHFR 基因扩增越【yuè】多，与【yǔ】 DHFR 基【jī】因连锁的目的蛋【dàn】白【bái】基因也表达得越多]悬【xuán】浮培养【yǎng】时【shí】，请使用悬浮生长培养【yǎng】基，培【péi】养基为：EX-CELL CD-CHO CHOSerum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich)添加【jiā】物：L- 谷【gǔ】氨酰胺（Sigma-Aldrich）Anti-Clumping Agent(Gibco)备注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按【àn】照培养基配制说明书配制【zhì】，L-谷氨【ān】酰胺配【pèi】制浓度为 200mM，工作浓度为【wéi】 8mM（即稀释 25 倍，如【rú】 500ml CHOSerumfreeMedium中【zhōng】添加 20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗【kàng】结团剂使用为 1%，即 500ml CHOSerum-free Medium 中添【tiān】加 5ml 抗结团【tuán】剂）
1）培【péi】养条件： 气【qì】相：空气，95%；二氧化【huà】碳，5%。 温【wēn】度【dù】：37 摄氏度，培【péi】养箱湿度为 70%-80%。
2）冻存液：90%*培养【yǎng】基（贴壁生长冻存时）或 90%悬浮培【péi】养基（悬浮生时【shí】），10%DMSO，现用【yòng】现配。液氮【dàn】储【chǔ】存。
二． 细胞 处理 ：
1） 复苏细【xì】胞：将含有 1mL 细【xì】胞悬【xuán】液的冻存管在 37℃水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇晃解【jiě】冻，加入 4mL 培养【yǎng】基混合均匀。在【zài】 1000RPM 条件下离心【xīn】 4 分钟，弃去【qù】上【shàng】清【qīng】液，补加 1-2mL 培养基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中培养【yǎng】（或将细胞悬【xuán】液加【jiā】入 10cm 皿【mǐn】中，加入约 8ml 培养【yǎng】基，培养过夜）。第二天换【huàn】液并检查【chá】细胞密度【dù】。
2） 细胞【bāo】传代：如果细胞【bāo】密【mì】度达 80%-90%，即可【kě】进行传代【dài】培养。对于贴【tiē】壁细胞，传代可参考以下【xià】方法：
1. 弃去培养上清，用不【bú】含钙、镁【měi】离子的 PBS 润【rùn】洗细胞 9-23 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于【yú】培养瓶中【zhōng】，置于 37℃培养箱中消化 9-23 分钟，然后【hòu】在显微镜下观察细胞消【xiāo】化情况【kuàng】，若细胞大部分变圆并【bìng】脱落，迅速【sù】拿【ná】回操作台，轻敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后加【jiā】少量培养【yǎng】基终止消【xiāo】化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打【dǎ】匀【yún】后吸出，在 1000RPM 条件【jiàn】下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培【péi】养液后【hòu】吹匀【yún】。
4. 将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到【dào】新的【de】含 8ml 培养基的新【xīn】皿中或者瓶中。对于悬浮细胞，传【chuán】代可参考以【yǐ】下【xià】方法：
方法一：收【shōu】集细胞，1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上【shàng】清液，补加 1-2mL培【péi】养液后吹【chuī】匀【yún】，将细【xì】胞【bāo】悬【xuán】液【yè】按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
方法【fǎ】二：可选【xuǎn】择半数换液方【fāng】式，弃去半数培养【yǎng】基后，将剩余【yú】细【xì】胞悬起，将细胞悬【xuán】液按 1：2 到 1：3 的比例分【fèn】到【dào】新【xīn】的含 8ml 培养基【jī】的新皿中或者瓶中。
3）细胞【bāo】冻存：待细胞生长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁【bì】细胞冻存时，弃去【qù】培养基【jī】后加【jiā】入少【shǎo】量胰【yí】酶，细胞变圆脱【tuō】落【luò】后，加【jiā】入约 1ml 含【hán】血清的【de】培养【yǎng】基后【hòu】加入冻存管中，再添加 10%DMSO 后【hòu】进行冻存。悬浮【fú】细胞冻存【cún】时，应将细胞【bāo】收集，1000RPM 条件下离【lí】心 4 分钟，少量保存上【shàng】清液（防止细胞【bāo】吸走），加入【rù】部分【fèn】新鲜培养基，加入【rù】到冻存管中，在冻存管中加入【rù】 10%DMSO 后进行冻存。
 
中国仓鼠卵巢细胞(CTLA4 Ig-24)注意事项：
1. 收到细【xì】胞后【hòu】，若发现干冰已挥发干净、冻存【cún】管瓶【píng】盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请【qǐng】立即【jí】与我们电联。
2. 所有动物细【xì】胞均视为有潜【qián】在【zài】的生物【wù】危害性，必须在【zài】二级生物安全台【tái】内操作，并请注意【yì】防护，所有废液【yè】及接触过此细胞的器皿需要灭菌【jun1】后方能丢弃。