中国仓鼠 卵巢细胞（CHO-S）

中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)
细胞介绍
贴壁生长【zhǎng】及悬浮【fú】生长均可（用于蛋白表达时，应使【shǐ】用悬浮生长【zhǎng】状态，此时细胞生长状态更好，比表面积【jī】更高，生【shēng】物反应器【qì】中的传【chuán】质、传【chuán】热效率更高，同时也可【kě】提高生【shēng】物反应器【qì】空间使用【yòng】效率。工业上大规【guī】模生产【chǎn】单抗，重组【zǔ】蛋，大【dà】部分使用悬浮培养【yǎng】法来生产）
 
细胞特性
1  来源：中国仓鼠
2  形态 ：成纤维细胞样
3  含量：>1x10 6 个/mL
4  污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5  规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
 
运输和保存【cún】 ：可选择【zé】干冰运【yùn】输及发送复苏存活细胞方【fāng】式：（1）干冰运输，收到后立即【jí】转入液氮【dàn】冻存或直【zhí】接复苏；（2）存活【huó】细胞，收到后应继续生【shēng】长，传代【dài】达到细胞生长状态良【liáng】好时，再进行冻存【cún】。具体【tǐ】操作见细【xì】胞【bāo】培养步骤。
 
中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
一． 培养基 及 培养 冻存 条件准备：
1）培养基信息：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,ChemicallyDefined(Sigma-Aldrich)添加物：L- 谷氨酰胺（Sigma-Aldrich）Anti-Clumping Agent(Gibco)备【bèi】注 ：CD-CHO CHO Serum-free Medium 请按照【zhào】培养基配制说【shuō】明书配制，L-谷【gǔ】氨酰胺配制【zhì】浓度为 200mM，工作浓度为 8mM（即稀【xī】释【shì】 25 倍，如 500ml CHO Serum-freMedium 中添加【jiā】 20ml 200mM L-谷氨【ān】酰胺，抗结【jié】团剂【jì】使用【yòng】为 1%，即 500ml CHOSerum-free Medium 中添加 5ml 抗结团【tuán】剂）
2）培养条【tiáo】件： 气相：空【kōng】气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培【péi】养箱湿度【dù】为 70%-80%。
3）冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO，现【xiàn】用现【xiàn】配。液氮【dàn】储存。
二． 细胞 处理 ：
传代【dài】、转染、建库及实验【yàn】室【shì】规模小试方法：赛【sài】百【bǎi】慷（上海）生物技术股份有限【xiàn】公司提供的 CHO-S 细胞为已【yǐ】驯化的细胞【bāo】，具有良【liáng】好的【de】适应悬浮生长及适应【yīng】无【wú】血【xuè】清培养基生长特性。
传代 方法：
1.10cm 皿中培养【yǎng】：使用计数器（计数器或【huò】者血球计【jì】数【shù】板计数）计数，接种密度为 3×10 5 个【gè】细【xì】胞【bāo】/ml 接种【zhǒng】于提前 37℃预热的新鲜培养基中（建议培【péi】养基取 7-8ml，此时细胞【bāo】生长状态较好），置【zhì】于摇床上【shàng】生长【zhǎng】，转速【sù】为 120-130rpm，湿度为 9-23%，5%二氧化碳【tàn】，温度为 37℃。
2.培养约【yuē】 9-23 天，细胞【bāo】密度达到 1×10 6 个【gè】活细胞【bāo】/ml 时，应 1000rpm，25℃离心【xīn】5min，离【lí】心【xīn】后计数【shù】（此时应稀释），然后接种密度为【wéi】 3×10 5 个细胞【bāo】/ml 接种于【yú】提【tí】前【qián】 37℃预【yù】热的新【xīn】鲜培养基中。细胞数目【mù】足够时，可冻存【cún】。也可选择 125ml 或【huò】者 250ml 摇瓶中培养【yǎng】细胞。（注意细【xì】胞培养液体积一般在总体积【jī】的【de】五【wǔ】分之一，如在 125ml 摇瓶中加【jiā】入 25ml 培养物，应注意在摇瓶中培养细胞时【shí】应将瓶盖稍微【wēi】拧松，以便于气体交换，同时也不【bú】宜拧得过松，防【fáng】止【zhǐ】细胞污染）
转染 方法：
在连【lián】续 5 代【dài】细胞密度未超过 2×10 6 个【gè】活细胞/ml 时，可以使用 FreeStyle Max 转【zhuǎn】染试剂（Gibco，货号：16447）在【zài】 CD CHO Serum-free Medium 中直接转染。（注
意【yì】：Anti-Clumping Agent 会干扰 FreeStyle Max 转染试【shì】剂【jì】转染效率，同时也【yě】会干扰其他脂质体型转染试剂的转染【rǎn】效【xiào】率）
建库方法 ：
若需要建库，可将细【xì】胞接种于 125ml 摇【yáo】瓶中（接种【zhǒng】密度为 3×10 5 个细胞/ml，总体【tǐ】积为【wéi】 25ml），此【cǐ】方【fāng】法【fǎ】同【tóng】样适用【yòng】于稳定表达所【suǒ】需要蛋白的【de】细【xì】胞株的建库工作【zuò】。建库【kù】时，需要【yào】先建初级库（master bank）（一般为 10 支，每支细胞总数【shù】不少于 4.5×10 7 个【gè】细【xì】胞），此步骤结束后，从冻存的初级库中取出一【yī】支复苏【sū】，按照同样步骤建次级【jí】库（working bank）（相同的，一般为 10 支，每支细胞【bāo】总【zǒng】数【shù】不少于 4.5×10 7个【gè】细胞）。实【shí】验【yàn】室 规【guī】模小试【shì】方法【fǎ】：将挑选出的稳定【dìng】细胞株从 96 孔板到 24 孔板到 6 孔【kǒng】板到【dào】 10cm 皿中逐级扩大培养后（此时【shí】需要注意【yì】在培养【yǎng】过程【chéng】中应及时保种，以防止后续步骤出【chū】现【xiàn】污染，及应对可能【néng】的表达量衰退【tuì】现象）以 3×10 5 个细胞【bāo】/ml 接种于 125ml 摇瓶中，转速为【wéi】120-130rpm，温度为 37℃，湿度为【wéi】 9-23%，连续【xù】培【péi】养一【yī】周，每天【tiān】取样做出【chū】相应的细胞【bāo】生长曲线，细【xì】胞活率【lǜ】曲线，蛋白表达曲线，可根据实际情况，每天取样测出培【péi】养基中葡萄糖含量，以便决定是否要补加葡【pú】萄【táo】糖，同时【shí】可使用 CHO Feedioreactor Supplement 作为细胞发酵【jiào】中【zhōng】补料，同时做出相应的【de】细【xì】胞生长曲线，细胞活率曲线，蛋白表达曲线【xiàn】，为中试放大补料添加【jiā】做【zuò】出合理【lǐ】数据支持。
 
中国仓鼠 卵巢细胞(CHO-S)注意事项：
1. 收到【dào】细胞后，若发【fā】现干【gàn】冰已挥发干【gàn】净、冻存管瓶【píng】盖脱落【luò】、破损及细【xì】胞有污染，请立即与我们电联。
2. 所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为有潜【qián】在的生物危害性，必须在二级生【shēng】物安全台内操作，并【bìng】请注意防护【hù】，所有【yǒu】废液【yè】及接触【chù】过此【cǐ】细胞的器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃【qì】。