人高转移肺癌细胞（95-D）

人高转移肺癌细胞（95-D)
细胞介绍
这是一株高转移肺癌细胞。
 
细胞特性
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者【zhě】lmL冻存管包装运输和保【bǎo】存【cún】：可选【xuǎn】择干冰运输及发送复苏【sū】存活细胞【bāo】方式：（1)干冰运【yùn】输，收到后立即转入液氮【dàn】冻存或直接复苏；（2)存【cún】活细胞，收到后应继【jì】续【xù】生长，传代达到细胞生长【zhǎng】状态良好【hǎo】时，再进。具【jù】体操作见细胞培养【yǎng】步骤【zhòu】。
 
人高转移肺癌细胞（95-D)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC03 1.5g/L,D-葡【pú】萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏【shì】度，培【péi】养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存液：90%*培【péi】养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻【dòng】存管【guǎn】在【zài】37°C水浴【yù】中迅速【sù】摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合【hé】均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去【qù】上【shàng】清液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养【yǎng】瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培【péi】养【yǎng】过夜）。第二天换液并检查细胞【bāo】密度。细胞传代：如果细胞密【mì】度达【dá】80%-90%，即可进行传【chuán】代培养【yǎng】。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-22次。力【lì】口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟【zhōng】，然后在显微镜下观【guān】察细胞消【xiāo】化情【qíng】况，若【ruò】细胞【bāo】大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿作台，轻敲几下培养瓶后加少量【liàng】培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶【píng】补加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条件下【xià】离心【xīn】4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养【yǎng】液【yè】后吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中【zhōng】或者瓶【píng】中【zhōng】。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一【yī】：收集细胞【bāo】，1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养液后吹匀，将细【xì】胞悬【xuán】液按【àn】1: 2到【dào】1: 5的比例【lì】分到新的含8ml培养基【jī】的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换【huàn】液方式，弃去半数【shù】培养基后，将剩【shèng】余细胞【bāo】悬起，将细胞悬液按1: 2到1: 3的比例分【fèn】到新的含8ml培养基【jī】的【de】新皿【mǐn】中或者瓶中。细【xì】胞冻存【cún】：待细胞【bāo】生长【zhǎng】状态良好时【shí】，可进行细胞冻存【cún】。贴壁细【xì】胞冻存时，弃【qì】去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落【luò】后【hòu】，加入约lml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收【shōu】集，1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分【fèn】钟，少量【liàng】保存上清液（防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养【yǎng】基，加入【rù】到冻存管中，在冻存管【guǎn】中加入【rù】1〇%DMSO后【hòu】进【jìn】行【háng】冻存【cún】。
 
人高转移肺癌细胞（95-D)注意事项：
收【shōu】到细胞后，若【ruò】发现干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破【pò】损及细胞【bāo】有污染，请立【lì】即与我们电联。
所有动物细胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害【hài】性，必须在【zài】二【èr】级生物安全台内操作，并请注意【yì】防【fáng】护，所有【yǒu】废液及接触【chù】过此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃【qì】。