仓鼠卵巢细胞（Led）

仓鼠卵巢细胞(Led)
细胞介绍
Lecl (原【yuán】先叫做Pro-5wgaRl 3C,ATCC)是【shì】从脯【pú】氨酸缺陷型的CHO克隆Pro-5中【zhōng】挑选出来的能抗麦芽凝集【jí】素的突变株【zhū】。Lecl缺【quē】乏称作GIcNAc-Tl的【de】糖基转移酶，从【cóng】而N-连接碳水化合物【wù】被阻断在Man5GlcNAc2Asn中间体。对于【yú】研【yán】究N-连接【jiē】糖基化改变【biàn】对内【nèi】源糖蛋白或病【bìng】毒感染【rǎn】、以克隆DNA转染产生的糖蛋白的功能和【hé】区隔化的影响，这【zhè】些细胞十分有用。
 
细胞特性
1)来源：仓鼠卵巢
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。收【shōu】到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件【jiàn】下，离心【xīn】5min后【hòu】，于洁净操作台弃【qì】去上清，加【jiā】入【rù】推荐【jiàn】使用【yòng】的培养基【jī】后【hòu】转移至l〇cm培【péi】养皿或者T25培养瓶【píng】中培【péi】养，传代达【dá】到细胞生长状态良好时【shí】，再进行冻存。具体操作【zuò】见细【xì】胞培养步骤。
 
仓鼠卵巢细胞(Led)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备ct-MEM 培养基(ct-MEM，GIBCO，添【tiān】加 NaHC031.5g八【bā】，肌醇43.2mg八，叶酸8.82mg八【bā】,0-疏基乙醇7.8mg八)，90%;胎牛血清，10%。
2.培【péi】养【yǎng】条【tiáo】件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3. 冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存【cún】管【guǎn】在【zài】37°C水浴【yù】中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细【xì】胞【bāo】悬【xuán】液加【jiā】入培养瓶中培【péi】养过夜（或【huò】将【jiāng】细胞悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养【yǎng】过夜）。第二天换液并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用【yòng】不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次【cì】。力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置【zhì】于37°C培【péi】养箱中消化9-23分【fèn】钟，然【rán】后在显微镜下观察细胞消【xiāo】化情【qíng】况【kuàng】，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿操【cāo】作台，轻【qīng】敲几下【xià】培养瓶后加少量培养基终止消【xiāo】化【huà】。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻【qīng】打匀【yún】后吸出【chū】，在1000RPM条件【jiàn】下离心【xīn】4分钟，弃【qì】去上清【qīng】液，补加【jiā】l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培【péi】养基的新中或【huò】者瓶中。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存【cún】。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培【péi】养基后加【jiā】入少量【liàng】胰酶【méi】，细胞变圆脱落后，加【jiā】入约【yuē】lml含血【xuè】清的培养基后【hòu】加入冻存管【guǎn】中【zhōng】，再添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存。
 
仓鼠卵巢细胞(Led)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发【fā】干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及【jí】细【xì】胞有污【wū】染【rǎn】，请立即与我们【men】电联。
所有【yǒu】动物【wù】细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在【zài】二【èr】级生物安【ān】全【quán】台内操【cāo】作，并请注意【yì】防【fáng】护，所有废液及接触【chù】过此【cǐ】细胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。