人视网膜色素上皮细胞 （D407）

人视网膜色素上皮细胞 (D407)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM 培养基(DMEM:GIBCO,添加 NaHC031.5g八)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏【shì】度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3. 冻存液：90%*培【péi】养基【jī】，10%DMSO,现用【yòng】现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬液的【de】冻存管在【zài】37°C水【shuǐ】浴中迅速【sù】摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混【hún】合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬【xuán】液加入培养瓶中培养【yǎng】过夜【yè】（或将细【xì】胞悬液【yè】加入l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培【péi】养基，培养过夜）。第二天【tiān】换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人视网膜色素上皮细胞 (D407)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-23次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-23分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细【xì】胞大部分变圆【yuán】并【bìng】脱落，迅速拿回操作台，轻敲【qiāo】几【jǐ】下培养瓶后加少【shǎo】量培【péi】养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸出【chū】在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清【qīng】液【yè】，补加【jiā】l-2mL培养【yǎng】液后吹【chuī】匀。将【jiāng】细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到【dào】1: 5的比例分【fèn】到新的【de】含8ml培养基的新皿【mǐn】中或【huò】者【zhě】瓶中。
 
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞冻【dòng】存时【shí】，弃【qì】去培养基【jī】后加入少【shǎo】量【liàng】胰酶，细胞变【biàn】圆脱落后，加入约lml含血【xuè】清的培养【yǎng】基后加入冻存【cún】管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后【hòu】，若【ruò】发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破【pò】损及细胞有污染，请立即与我【wǒ】们【men】电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在【zài】的生【shēng】物【wù】危害性【xìng】，必须在二级生物安全台内操作，并请【qǐng】注意防护【hù】，所有废液及接触过【guò】此细胞的器皿需要灭菌【jun1】后【hòu】方能丢弃【qì】。
 
人视网膜色素上皮细胞 (D407)细胞特性：
1)来源：视网膜
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
运输【shū】和保存：使用含【hán】有胎牛血【xuè】清的2ml冻存管发送【sòng】存【cún】活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温【wēn】条件【jiàn】下，离心5min后【hòu】，于洁净操作【zuò】台【tái】弃去【qù】上清，加入推荐使用的培养【yǎng】基后转移【yí】至l〇cm培【péi】养皿或者T25培养【yǎng】瓶【píng】中【zhōng】培养，传代达到细胞生长状态良好时【shí】，再进行冻存。具体操作【zuò】见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。