猴胚胎肾上皮细胞（marcl45）

猴胚胎肾上皮细胞(marcl45)
细胞特性
1)来源：肾
2)含量：>lxl06 个/mL
3)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运【yùn】输和保【bǎo】存【cún】：可选择干冰运输及【jí】发送【sòng】复苏存活细胞方式【shì】：（1)干冰运输，收到后立即转入液【yè】氮冻存或直【zhí】接【jiē】复苏；（2)存活细胞，收到后【hòu】应继续生【shēng】长，传代达到细胞生【shēng】长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操作见细【xì】胞【bāo】培【péi】养步骤。
 
细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 D/F12 培【péi】养基(D/F12, GIBCO);北美胎牛【niú】血清【qīng】(UnitedStates，GIBCO)，10%;双抗 1%。
2.培养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37摄氏【shì】度【dù】，培养湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
 
猴胚胎肾上皮细胞(marcl45)2)细胞处理：
1.复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞【bāo】悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，离【lí】心管【guǎn】加入4mL培养基混【hún】合均匀。在1000RPM条件下离心9-23分【fèn】钟，弃去上清液，补【bǔ】加【jiā】l-2mL培【péi】养基后吹句【jù】。然后将所有细胞悬液【yè】加入T25培养瓶中【zhōng】培养，加培养基至6ml。
2.细【xì】胞传代：如【rú】果细胞密度达80%-90%，即可进行传代【dài】培养【yǎng】。对【duì】于贴壁细胞，传代可参考以下方【fāng】法【fǎ】：弃去培养上清，用【yòng】不【bú】含钙【gài】、镁【měi】离【lí】子的PBS润洗细胞9-23次。力口 lm丨消【xiāo】化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于3C培养箱中【zhōng】消【xiāo】化9-23分钟【zhōng】，然后在显微镜下观察【chá】细【xì】胞消化情况，若【ruò】细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加2ml*培养【yǎng】基【jī】终止【zhǐ】消化。
轻轻打匀后吸【xī】出，在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心5分钟，弃【qì】去上清液，加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。
将细【xì】胞悬液按1:2到【dào】1:5比例分到新的含【hán】6ml培养基的新皿中或者瓶中。3.细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时【shí】，可【kě】进行【háng】细胞【bāo】冻存。
 
下面T25瓶为例；
1.细胞冻存时，弃去培养基【jī】后【hòu】，PBS清洗瓶底【dǐ】9-23次后【hòu】加入lml胰酶，细胞变圆脱落后，加【jiā】入2ml*培养基终止消化，可【kě】使用血球计数【shù】板计数。1000RPM离心5分钟【zhōng】去掉上【shàng】清【qīng】。用血清重悬浮【fú】，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO迅速混匀，按每lml的数量分【fèn】配到冻【dòng】存管【guǎn】中，注意冻【dòng】存【cún】管【guǎn】做好标识。本公司【sī】按每个冻存管【guǎn】细胞数目大于1X106个细胞冻存【cún】。将冻存【cún】管置于程序【xù】降温盒中，放入-80度冰箱，至【zhì】少2个【gè】小时以后转入【rù】液氮灌储存【cún】。记录冻存管位置以便次拿取。
 
猴胚胎肾上皮细胞(marcl45)注意事项：
收到细胞【bāo】后，若发现干冰己挥发【fā】干净【jìng】、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损【sǔn】及细胞有污染【rǎn】，请立即与我们电【diàn】联。
所有动物【wù】细胞均视为有【yǒu】潜在的生【shēng】物危害性，必须在二级生【shēng】物安全【quán】台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此【cǐ】细胞的器皿【mǐn】需要灭【miè】菌后方【fāng】能【néng】丢弃。