狗肾细胞（MDCK（NBL-2）

狗肾细胞(MDCK(NBL-2)
细胞介绍
1958年九月S.H. Madin and N.B. Darby从一【yī】只【zhī】外观正常的成【chéng】年雌【cí】性英国【guó】小猎犬的【de】肾分离等到MDCK细【xì】胞株【zhū】。角【jiǎo】蛋白免疫过氧【yǎng】化物【wù】酶染色呈阳性。MDCK被【bèi】用于研究0 -粥样蛋白前体的处理【lǐ】及其蛋白水解产物。
 
细胞特性
1)来源：狗肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微镜下确认【rèn】细胞生【shēng】长状【zhuàng】态，去掉封口膜并将T25瓶置【zhì】于【yú】37°C培养【yǎng】约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长满（90%以【yǐ】上）请及时进行细【xì】胞传代，传代培养用【yòng】6ml本公司附带的【de】*培养【yǎng】基。
5.接【jiē】到细胞【bāo】次日，请【qǐng】检查细胞是否污【wū】染【rǎn】，若发现污染或疑似污染，请及时【shí】与【yǔ】我们取得电联【lián】。细【xì】胞用途：仅供使用。
 
狗肾细胞(MDCK(NBL-2)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEM a培养【yǎng】基(MEM a，GIBCO)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2. 培【péi】养【yǎng】条件【jiàn】：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速【sù】放入37°C水浴中（水【shuǐ】面要低【dī】于【yú】冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先【xiān】准【zhǔn】备好的含有4mL培养基【jī】的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，加【jiā】入lmL培养【yǎng】基后吹【chuī】匀。然后将所【suǒ】有【yǒu】细胞悬液【yè】移入含有【yǒu】5ml培养【yǎng】基的【de】培【péi】养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密【mì】度【dù】。
 
细胞传【chuán】代【dài】：如果细胞密度【dù】达80%-90%，即可进【jìn】行【háng】传【chuán】代培养【yǎng】。对于贴壁细胞，传代可参考以下【xià】方法：弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-20次。力【lì】口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培【péi】养箱中【zhōng】消化9-20分钟，然后在显微镜下观【guān】察【chá】细胞【bāo】消化情【qíng】况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿【ná】回【huí】操【cāo】作台，轻【qīng】敲几下【xià】培养瓶【píng】后加入3ml此细胞【bāo】的培养【yǎng】基终止消化。轻轻吹打后吸出【chū】，移入【rù】15ml离心【xīn】管【guǎn】中【zhōng】，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，加入lmL培养液后吹【chuī】匀。移入到【dào】事先准【zhǔn】备【bèi】好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中【zhōng】或含有14ml培养【yǎng】基的T-75培【péi】养瓶中培养。细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时，先
要消化处理并进行【háng】细胞计数。消化方法按照细胞【bāo】传代方【fāng】法的【de】9-20步骤【zhòu】进行【háng】，后的【de】重悬【xuán】液使用血清。悬【xuán】浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至【zhì】终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按【àn】每lml的数量【liàng】分配到【dào】冻存管【guǎn】中【zhōng】。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细【xì】胞冻【dòng】存。
 
狗肾细胞(MDCK(NBL-2)注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己【jǐ】挥发【fā】干净、冻存【cún】管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有污染【rǎn】，请【qǐng】立即与我【wǒ】们电联。
所有【yǒu】动物【wù】细胞均视为有潜【qián】在的生物【wù】危害性，必须在二级【jí】生【shēng】物安全【quán】台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接【jiē】触过【guò】此细胞的器皿需【xū】要灭【miè】菌后方能丢弃。