人结肠腺癌细胞（COLO-320）

人结肠腺癌细胞(COLO-320)
细胞介绍：
该细胞能合成复合胺，肾上腺素。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC031.5g八【bā】, D-葡萄糖2.5g八，丙酮【tóng】酸钠O.llg八)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。或DMEM 培【péi】养基(GIBCO,添加 NaHC031.5g八)，90%;胎牛血清，10%。
2. 培养【yǎng】条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞【bāo】悬【xuán】液的【de】冻存管在37°C水【shuǐ】浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养基后吹【chuī】匀【yún】。然后将所有细胞悬液加入【rù】培养瓶中培养【yǎng】过夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿【mǐn】中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天换【huàn】液并【bìng】检【jiǎn】 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人结肠腺癌细胞(COLO-320)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不【bú】含【hán】钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-23次【cì】。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱【xiāng】中消化9-23分钟，然后在显微镜下观察【chá】细【xì】胞消化情【qíng】况，若【ruò】细胞大部【bù】分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几【jǐ】下培【péi】养瓶后加少【shǎo】量培养基终止【zhǐ】消化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分【fèn】 钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将细【xì】胞【bāo】悬液【yè】按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或【huò】者 瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可【kě】进行细胞冻存【cún】。贴壁【bì】细【xì】胞冻存时，弃【qì】 去【qù】培养基后【hòu】加入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血清的培养基【jī】后加入冻存管【guǎn】中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发【fā】干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损【sǔn】及【jí】细胞有污染【rǎn】，请立 即与我们电联。
所有动物细胞【bāo】均视为有潜【qián】在的生物危害性，必须在二【èr】级生物安全【quán】台内操作，并请注 意防护，所有【yǒu】废液及接触【chù】过此细胞【bāo】的【de】器【qì】皿【mǐn】需要灭菌后【hòu】方能丢【diū】弃。
 
人结肠腺癌细胞(COLO-320)细胞特性：
1)来源：人结肠癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：使用含有胎【tāi】牛血清【qīng】的2ml冻存【cún】管发送存【cún】活细胞。收到细胞后， 可【kě】在1000RPM，常温【wēn】条件下【xià】，离心5min后，于洁净【jìng】操【cāo】作台弃去【qù】上清，加入【rù】推荐【jiàn】使用的培养基后转【zhuǎn】移至l〇cm培养皿【mǐn】或者T75培【péi】养瓶中培养，传代达到【dào】细胞【bāo】生长【zhǎng】 状态良好时，再进行冻存。具体操作【zuò】见细胞培养步【bù】骤。