犬肾细胞系/ 野生型（MDCK）

犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)
细胞介绍：
该【gāi】细胞系源【yuán】自一只雌【cí】性英国可卡犬的肾脏组织，由S.H. Madinand N.B. Darby于1958年建【jiàn】立【lì】。该细【xì】胞为角蛋白【bái】阳【yáng】性细胞。
 
细胞特性：
1)来源：狗肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显【xiǎn】微【wēi】镜下确认【rèn】细胞生长【zhǎng】状态，去掉封口膜并将T25瓶【píng】置于【yú】37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如【rú】果细【xì】胞长满（90%以【yǐ】上）请【qǐng】及时进行【háng】细胞传【chuán】代，传代培养用6ml本公司附带的*培养基。
5.接到细胞【bāo】次日，请检查细胞是否【fǒu】污染，若发现污染或疑似【sì】污染，请及时与我们取【qǔ】得【dé】电【diàn】联。
 
犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备MEM a培养基(MEM a，GIBCO)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培养【yǎng】条件：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬液【yè】的冻存管迅速【sù】放入37°C水浴中（水面要低于冻存管盖【gài】部【bù】）摇晃解【jiě】冻，移入事先准【zhǔn】备好的含【hán】有【yǒu】4mL培养基的15ml离心管中混【hún】合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃【qì】去上清液，加入lmL培【péi】养基后吹匀【yún】。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培【péi】养【yǎng】基的培养瓶中培养过夜【yè】。第二天换液并检查【chá】细胞密度【dù】。细胞【bāo】传代：如果细【xì】胞密度达80%-90%，即可进行传【chuán】代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细【xì】胞9-23次【cì】。力【lì】口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消【xiāo】化9-23分【fèn】钟，然后【hòu】在显微镜下观察细胞消化情况，若【ruò】细胞【bāo】大部分【fèn】变圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养瓶后【hòu】加【jiā】入3ml此细胞的培【péi】养基终【zhōng】止消化。轻轻【qīng】吹打后【hòu】吸【xī】出，移入15ml离心管【guǎn】中，在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀。
移入到事先准备好的含【hán】有5ml培养基的T-25培养瓶【píng】中【zhōng】或含有14ml培【péi】养基的T-75培养瓶【píng】中培【péi】养。细胞【bāo】冻存：待【dài】细胞【bāo】生【shēng】长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存【cún】时，先要消【xiāo】化处理并进行细【xì】胞计数。消【xiāo】化【huà】方【fāng】法按照细胞传代方的9-23步骤进行，后的【de】重悬液【yè】使用血清。悬浮细胞直接计【jì】数【shù】后离心，用血清重悬浮，加DMSO至【zhì】终浓度【dù】为【wéi】10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的数量分配到冻【dòng】存管中。本公司按每个冻存管【guǎn】细胞【bāo】数目【mù】大于1X106个细胞冻存。
 
犬肾细胞系/ 野生型(MDCK)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖【gài】脱落、破损【sǔn】及细胞【bāo】有污染【rǎn】，请立【lì】即与我们电联【lián】。
所有动物细胞均【jun1】视为【wéi】有潜在的【de】生物危害性，必须在【zài】二级生物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细【xì】胞的器皿【mǐn】需【xū】要【yào】灭菌后方能【néng】丢【diū】弃【qì】。