人恶性黑色素瘤细胞（MeWo）

人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)
细胞特性
1)来源：黑色素瘤
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和【hé】保存：使用含有胎牛【niú】血清的2ml冻【dòng】存管【guǎn】发送存【cún】活细【xì】胞。收到细胞后，可在1000RPM，常【cháng】温条件下【xià】，离【lí】心5min后，于洁净【jìng】操作台弃去上清，加【jiā】入推荐使用的【de】培养【yǎng】基后转移【yí】至【zhì】l〇cm培【péi】养皿或者T25培养瓶中培养，传代【dài】达到细【xì】胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操【cāo】作见细胞培养【yǎng】步【bù】骤。
 
人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)细胞用途：仅供使用。
细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC031.5g八,D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2. 培养条件【jiàn】：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度：37摄氏【shì】度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配【pèi】。液【yè】氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将【jiāng】含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻【dòng】，加【jiā】入4mL培养【yǎng】基【jī】混【hún】合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然【rán】后将所【suǒ】有细胞【bāo】悬液【yè】加入培【péi】养瓶中培养过夜【yè】（或将
细【xì】胞【bāo】悬液加【jiā】入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换【huàn】液并检查细胞密度【dù】。
 
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可【kě】进行【háng】传【chuán】代培【péi】养。对于贴壁细胞，传代可参考【kǎo】以【yǐ】下方法：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的【de】PBS润【rùn】洗细胞9-23次。力【lì】口 2m丨消化【huà】液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-23分钟【zhōng】，然后在显微镜【jìng】下【xià】观察细胞消化情况，若细胞大部【bù】分变圆【yuán】并脱落，迅【xùn】速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加少量培【péi】养基终止消化。
按6-8ml/瓶【píng】补加培养【yǎng】基，轻轻打【dǎ】匀后吸【xī】出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹匀。
将细胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中或【huò】者细胞【bāo】冻存：待细【xì】胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻【dòng】存时【shí】，弃去【qù】培养基【jī】后加入少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落【luò】后，加【jiā】入约lml含血【xuè】清【qīng】的培养基后加入存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻存。
 
人恶性黑色素瘤细胞(MeWo)注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发现干冰【bīng】己挥发干【gàn】净、冻存管瓶盖【gài】脱【tuō】落、破损【sǔn】及细胞有污染，请立【lì】即与我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜【qián】在的生【shēng】物危【wēi】害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有【yǒu】废液及接【jiē】触过此细【xì】胞的器皿需要灭菌后【hòu】方能丢【diū】弃【qì】。