鸡胚成纤维细胞（UMNSAH/DF-1）

鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)
细胞介绍
该细胞【bāo】是起源于【yú】10日龄【líng】的ELL-0鸡蛋的【de】鸡细胞株，自发永生化。分离原【yuán】代【dài】鸡胚成纤维细胞并在培养液【yè】中培养；传代直到衰【shuāi】老【lǎo】；在衰【shuāi】老过程【chéng】中离【lí】心以保持细胞培【péi】养在30%到60%满【mǎn】；不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有【yǒu】观察到克隆增【zēng】殖，说明这【zhè】些【xiē】细胞是永生化而没有转化。该细胞可【kě】作为【wéi】病毒【dú】增【zēng】殖、组【zǔ】蛋【dàn】白表达【dá】和重组病【bìng】毒生【shēng】产的基质。
 
细胞特性
1)来源：鸡胚
2)形态：成纤维细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先【xiān】在显微镜下确认细【xì】胞【bāo】生长状【zhuàng】态【tài】，去掉封口膜并将T25瓶置于【yú】37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长【zhǎng】满（90%以上）请及时进行细胞传【chuán】代，传代培养用【yòng】6ml本公【gōng】司【sī】附带的*培【péi】养基。
5.接到细胞次【cì】日，请检查细【xì】胞是否污染，若发【fā】现污染或疑似污染，请【qǐng】及【jí】时【shí】与我们取得电联【lián】。
 
鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)细胞用途：仅供使用。
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培【péi】养基(DMEM，GIBCO)，90%;胎牛血【xuè】清，10%。
2.培【péi】养【yǎng】条件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞【bāo】：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管迅速放入【rù】37°C水【shuǐ】浴【yù】中（水【shuǐ】面要低于【yú】冻存管盖部）摇【yáo】晃【huǎng】解冻，移入事【shì】先准备好的含【hán】有4mL培养基的15ml离心【xīn】管中混合均匀。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培
养基后【hòu】吹匀。然后将所有【yǒu】细胞悬液移入【rù】含有5ml培养【yǎng】基的【de】培养瓶中培养【yǎng】过夜。第二天【tiān】换液并检查细【xì】胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去【qù】培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细【xì】胞【bāo】9-23次。力【lì】口 2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中，置于【yú】37°C培养箱【xiāng】中消【xiāo】化9-23分钟，然后在显微镜下【xià】观察细胞消化情况【kuàng】，若细【xì】胞大部
分【fèn】变圆并【bìng】脱落【luò】，迅速拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。轻轻【qīng】吹【chuī】打后吸出【chū】，移入15ml离心管【guǎn】中，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟，弃去上清【qīng】液，加入lmL培养液后吹匀【yún】。
移入到事先准【zhǔn】备好的含有5ml培养【yǎng】基的T-25培【péi】养瓶中或含有14ml培养【yǎng】基的【de】T-75培养瓶中培养【yǎng】。
 
细胞冻存：待细胞生长状态【tài】良好时，可进【jìn】行细胞【bāo】冻【dòng】存。贴【tiē】壁细胞冻存时，先要消化【huà】处【chù】理并进行细胞计数【shù】。消【xiāo】化方【fāng】法按照细【xì】胞传代方【fāng】法的9-23步【bù】骤进行，后【hòu】的重悬液【yè】使用【yòng】血清。悬浮细胞直【zhí】接计数后离心，用血清【qīng】重悬浮，加DMSO
至终浓度为10%。加【jiā】入DMSO后【hòu】迅【xùn】速混匀，按每lml的【de】数量【liàng】分配到冻存管中。本公司按【àn】每个【gè】冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存【cún】。
 
鸡胚成纤维细胞(UMNSAH/DF-1)注意事项：
收【shōu】到细胞【bāo】后【hòu】，若【ruò】发现干【gàn】冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞有【yǒu】污染，请立即与我们电联。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视为【wéi】有潜在的生物危害性，必须在【zài】二级生【shēng】物安全台内操【cāo】作【zuò】，并请注意【yì】防【fáng】护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。