非洲绿猴肾细胞（Vero）

非洲绿猴肾细胞(Vero)
细胞介绍
Vero细胞株是日本千叶大学的Y. Yasumura和Y. Kawakita从【cóng】正【zhèng】常成年非【fēi】洲绿猴【hóu】的肾脏建株【zhū】的【de】。1964年6月15日B. Simizu将其从千叶【yè】大学带到国立健康【kāng】研究所(NIH)国【guó】立过敏【mǐn】及传染病研究所【suǒ】热带【dài】病【bìng】毒实验室时，己传至第93代。
 
细胞特性
1)来源：非洲绿猴正常肾
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输【shū】和保【bǎo】存：使用T25瓶充【chōng】液发【fā】送活细胞。收【shōu】到细胞后，请先在显微镜下检查细胞生【shēng】长状【zhuàng】态，并将T25瓶置于培养箱【xiāng】约6h或过夜后，再次检查【chá】细胞状态。若状态良【liáng】好【hǎo】，可进行细胞后续处理操【cāo】作，按照【zhào】以下方【fāng】式进行。若发现【xiàn】可疑污【wū】染物，请及时与我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。

非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞培养步骤
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培【péi】养基(DMEM-H，GIBCO,添加 NaHC031.5g/L)，90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液【yè】体培养【yǎng】基【jī】：GIBCO，11995-065)。
2.培【péi】养【yǎng】条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度【dù】，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴【yù】中迅速【sù】摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹【chuī】匀。然后【hòu】将【jiāng】所【suǒ】有细【xì】胞悬液加入培养瓶中培养过【guò】夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二【èr】天【tiān】换液并检
查细胞密度。
 
细胞传代：
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于【yú】贴【tiē】壁细胞，传代可参考以下【xià】方【fāng】法【fǎ】：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润【rùn】洗细胞9-23次【cì】。力口 2m丨【shù】消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化9-23分钟，然后在【zài】显微镜【jìng】下观【guān】察细胞消【xiāo】化【huà】情【qíng】况【kuàng】，若细胞大【dà】部分变圆【yuán】并脱【tuō】落，迅【xùn】速拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养瓶后加少量培养基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分
钟，弃去【qù】上【shàng】清【qīng】液【yè】，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养【yǎng】基【jī】的新皿中【zhōng】或者瓶中。
 
细胞冻存：
待【dài】细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻【dòng】存时，弃去培【péi】养【yǎng】基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培【péi】养基后加入冻【dòng】存管【guǎn】中，再【zài】添【tiān】加【jiā】1〇%DMSO后【hòu】进行【háng】冻存。
 
非洲绿猴肾细胞(Vero)注意事项：
收到细胞后，若【ruò】发现干冰己挥发【fā】干净、冻存【cún】管瓶盖【gài】脱落、破损及【jí】细胞有污染，请立即与我【wǒ】们电【diàn】联【lián】。
所有动【dòng】物细胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害性【xìng】，必须在二级生【shēng】物安全台内操作，并请【qǐng】注意防护，所有废【fèi】液及接触过此【cǐ】细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方【fāng】能【néng】丢弃。