人肺腺癌 （Calu-3）

人肺腺癌 (Calu-3)
细胞介绍：
该患【huàn】者为25岁白人男性，已经用环磷酰胺、争【zhēng】光霉素、阿霉素【sù】进行过治【zhì】疗【liáo】。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM 培养基(MEM, GIBCO，，添加【jiā】 NaHC031.5g八【bā】，丙酮酸钠O.llg八)；胎牛血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度【dù】，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中【zhōng】迅【xùn】速摇【yáo】晃解冻【dòng】，加入4mL培养基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀【yún】。然后将【jiāng】所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜【yè】（或将细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培【péi】养基，培【péi】养过夜）。第二天换液并检查细【xì】胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肺腺癌 (Calu-3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-23次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中，置于【yú】37°C培养箱中消化9-23分钟，然后在显微镜下观【guān】察细胞消化【huà】情况，若细胞大部【bù】 分【fèn】变【biàn】圆并【bìng】脱【tuō】落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶【píng】后加少【shǎo】量培养基终止消【xiāo】化。按【àn】6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例【lì】分【fèn】到新的【de】含8ml培养基的新皿【mǐn】中或者 瓶【píng】中【zhōng】。
 
细胞【bāo】冻存：待细【xì】胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去【qù】培【péi】养【yǎng】基后加入少量胰酶【méi】，细胞【bāo】变圆脱落【luò】后，加入约lml含【hán】血【xuè】清的培养【yǎng】基后加入冻存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干【gàn】冰己挥发干【gàn】净、冻【dòng】存管【guǎn】瓶盖脱落【luò】、破损【sǔn】及细胞有污【wū】染，请立即与我们电联。
所有动物【wù】细胞均视为有【yǒu】潜在的生物危害【hài】性【xìng】，必【bì】须在二【èr】级生物安全台内操作，并请注意【yì】防护，所有【yǒu】废液【yè】及接触过此细胞的【de】器皿需要【yào】灭【miè】菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌 (Calu-3)运输和【hé】保存：使用【yòng】含【hán】有胎牛血清的【de】2ml冻【dòng】存管发送存活细胞【bāo】。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于洁净【jìng】操作台弃去【qù】上清，加入推荐使【shǐ】用的培养基【jī】后转移至l〇cm培【péi】养【yǎng】皿或【huò】者T25培养瓶中培养，传代达到细胞生【shēng】长【zhǎng】 状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操【cāo】作【zuò】见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。