人肺腺癌细胞（SPC-A-1）

人肺腺癌细胞(SPC-A-1)
细胞介绍：
该细胞源自一位男性肺腺癌患者。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙【bǐng】酮酸【suān】钠O.llg八)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2.培【péi】养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱【xiāng】湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮【dàn】储【chǔ】存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解【jiě】冻【dòng】，加入4mL培养【yǎng】基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培【péi】养瓶中【zhōng】培养过夜【yè】（或将【jiāng】细【xì】胞悬液加【jiā】入【rù】l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查【chá】细胞密度【dù】。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肺腺癌细胞(SPC-A-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含【hán】钙、镁离【lí】子的PBS润洗【xǐ】细胞【bāo】9-21次。力口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于【yú】37°C培【péi】养箱中消化【huà】9-21分钟，然后在显微镜下观【guān】察细胞消化【huà】情况，若细【xì】胞大部分变圆并脱落，迅速【sù】拿回操作台，轻【qīng】敲几下【xià】培养瓶后加少量培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶【píng】补加培【péi】养基，轻轻打【dǎ】匀【yún】后吸出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将细胞【bāo】悬液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中【zhōng】。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法一：收集【jí】细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL 培养液后吹匀，将【jiāng】细【xì】胞悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培【péi】养基【jī】的新【xīn】皿中【zhōng】或者瓶中。
方【fāng】法【fǎ】二：可选择【zé】半数【shù】换液方式，弃去半数培【péi】养【yǎng】基后，将剩【shèng】余细胞悬起，将细【xì】 胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到【dào】1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中【zhōng】。
细胞冻存：待【dài】细胞生长状态良好时，可进行【háng】细胞冻【dòng】存。贴【tiē】壁【bì】细胞冻存【cún】时，弃【qì】 去培养基后加入少【shǎo】量胰酶【méi】，细【xì】胞【bāo】变【biàn】圆脱落后，加【jiā】入【rù】约lml含血清【qīng】的培养基【jī】后 加入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进【jìn】行冻【dòng】存。悬浮细【xì】胞冻存【cún】时，应将细胞收【shōu】集【jí】，1000RPM条件下【xià】离心4分钟，少量保存上【shàng】清液（防止细胞吸走)，加【jiā】入部分新鲜培养基，加入到冻存管【guǎn】中，在冻存管中加入1〇%DMSO后进行冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰【bīng】己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有【yǒu】污【wū】染，请立即与我【wǒ】们【men】电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害【hài】性，必须在二级生【shēng】物安全台【tái】内【nèi】操作【zuò】，并【bìng】请【qǐng】注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞【bāo】的器皿【mǐn】需要灭菌后【hòu】方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌细胞(SPC-A-1)运输和保存：可选择干冰【bīng】运输及【jí】发【fā】送复苏存【cún】活细胞方式【shì】：（1)干冰【bīng】运输，收到后立即转入液氮【dàn】冻存或直接复苏；（2)存【cún】活细胞，收到后应继【jì】续生长【zhǎng】，传代【dài】达到细胞【bāo】生长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具【jù】体【tǐ】操作见细胞【bāo】培养【yǎng】步骤。
细胞用途：仅供使用。