人肝癌细胞（SNU449）

人肝癌细胞(SNU449)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640:GIBC)，90%;胎牛血清，10%。
2.培养条件：气相：空气【qì】，95%;二【èr】氧化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄【shè】氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配【pèi】。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存【cún】管【guǎn】在【zài】37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有【yǒu】细胞悬液加入培养瓶【píng】中培养过夜（或将细胞悬液加入【rù】l〇cm皿中，加入约8ml培养基【jī】，培【péi】养过夜）。第二天换液并【bìng】检查【chá】细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(SNU449)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清，用【yòng】不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在显微镜下观察【chá】细胞消化情况，若细胞大部【bù】分变圆并脱落【luò】，迅速拿回操作台【tái】，轻敲【qiāo】几下培养【yǎng】瓶【píng】后加少量培养基终止消化。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻【qīng】打【dǎ】匀后【hòu】吸出，在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃去上【shàng】清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹匀。将【jiāng】细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中或者瓶【píng】中。
  
3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基【jī】后加入少量胰酶，细【xì】胞变【biàn】圆脱落【luò】后，加入【rù】约lml含【hán】血清的培养基【jī】后【hòu】加【jiā】入冻存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进行冻【dòng】存【cún】。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净、冻存管瓶【píng】盖脱落【luò】、破损及细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即【jí】与我们电联。
所有动【dòng】物【wù】细胞均视为有潜在的【de】生物危【wēi】害性，必须【xū】在【zài】二级生物安全台内操作，并【bìng】请注意防护【hù】，所有废液【yè】及接触过此细胞的器皿需要灭【miè】菌后方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(SNU449)运输和保存：使用含有【yǒu】胎牛【niú】血清的2ml冻存管发送【sòng】存活细胞【bāo】。收到【dào】细胞后，可在【zài】1000RPM，常温条【tiáo】件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上【shàng】清【qīng】，加入推荐使用【yòng】的培【péi】养基后转【zhuǎn】移至l〇cm培养皿或【huò】者T75培养瓶中培【péi】养，传代达到细胞【bāo】生【shēng】长【zhǎng】状【zhuàng】态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。