人肝癌细胞（SMMC-7721）

人肝癌细胞(SMMC-7721)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM-H 培养【yǎng】基(DMEM-H，GIBCO,添加 NaHC031.5g/L)， 90%;胎【tāi】牛血清【qīng】，10%。（DMEM液【yè】体培【péi】养基：GIBCO，11995-065)。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄【shè】氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加入【rù】4mL培【péi】养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然【rán】后将【jiāng】所有细【xì】胞悬【xuán】液加【jiā】入培养【yǎng】瓶中培养过夜（或【huò】将【jiāng】细胞【bāo】悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培【péi】养过夜）。第二【èr】天换【huàn】液【yè】并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肝癌细胞(SMMC-7721)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养【yǎng】瓶【píng】中，置于【yú】37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分【fèn】钟，然后在【zài】显微镜下观察【chá】细【xì】胞消化情况，若【ruò】细胞大【dà】部分变圆并脱落，迅速拿回【huí】操作台，轻敲几【jǐ】下培【péi】养瓶【píng】后加【jiā】少量培养基【jī】终止消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基，轻轻打【dǎ】匀后吸【xī】出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细胞悬液【yè】按1: 2到1: 5的【de】比例分【fèn】到【dào】新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。
 
细【xì】胞冻存：待【dài】细胞生【shēng】长状态良好时【shí】，可进行【háng】细胞冻存。贴壁细胞冻存时【shí】，弃去培养基【jī】后【hòu】加入少量【liàng】胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入约【yuē】lml含【hán】血清的培【péi】养基后加入冻存管【guǎn】中，再添加1〇%DMSO后进行冻存【cún】。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干冰【bīng】己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖【gài】脱【tuō】落【luò】、破损【sǔn】及细胞有污染，请立即与【yǔ】我们电联。
所有动物细【xì】胞均视为有潜在的生物【wù】危害【hài】性，必须【xū】在【zài】二级【jí】生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及【jí】接触过此细胞的【de】器皿【mǐn】需要灭菌后方【fāng】能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肝癌细胞(SMMC-7721)运【yùn】输和保存：使【shǐ】用【yòng】含【hán】有胎牛血清的2ml冻【dòng】存【cún】管发送存活细胞。收到细【xì】胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后【hòu】，于洁净操作台弃去上【shàng】清，加【jiā】入推荐使用的培养基【jī】后转移至【zhì】l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培【péi】养，传代达到细胞生长状态【tài】良好时，再进行冻存。具体操作见【jiàn】细【xì】胞培【péi】养步骤。
细胞用途：仅供使用。