人卵巢癌细胞 （SK-0V-3）

人卵巢癌细胞 (SK-0V-3)
细胞介绍：
SK-0V-3由G.Trempe和【hé】LJ.OId在【zài】1973年从卵巢肿瘤病人的腹水分离得到。此细胞对肿瘤坏死因【yīn】子和几种【zhǒng】细【xì】胞毒性药物【wù】包【bāo】括白喉毒素、顺【shùn】钼和阿【ā】霉【méi】素均耐受【shòu】。在裸【luǒ】鼠中【zhōng】致瘤，且形成与卵巢原位癌*的中度分化的腺【xiàn】癌。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】McCoy's 5A培养基【jī】，90%;北美【měi】胎牛血清，10%;双抗1%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空【kōng】气，95%;二氧化碳，5%。温度【dù】：37摄氏度【dù】，培【péi】养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1.复苏细胞【bāo】：将含【hán】有lmL细【xì】胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管在37°C水浴中【zhōng】迅【xùn】速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下【xià】离【lí】心4分钟，弃【qì】去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并【bìng】检查细胞密度。
2.细胞传代：如果细【xì】胞密度【dù】达80%-90%，即可进【jìn】行传代【dài】培养。
 
人卵巢癌细胞 (SK-0V-3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用【yòng】不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置【zhì】于37°C培【péi】养箱中消【xiāo】化【huà】9-21分钟，然后在显微镜【jìng】下观察细【xì】胞消化情【qíng】况，若细胞大【dà】部 分变圆并脱落，迅【xùn】速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培【péi】养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶【píng】补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上【shàng】清【qīng】液，补加l-2mL培【péi】养液后吹匀【yún】。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的【de】含8ml培养基【jī】的新皿中或【huò】者 瓶中【zhōng】。
3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-21次【cì】后加【jiā】入lml胰酶【méi】，细【xì】胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终【zhōng】止消化【huà】，可使【shǐ】用血【xuè】球计数【shù】板计【jì】数。1000RPM离心5分钟去掉上清。用血【xuè】清重悬浮，加DMSO至终浓度【dù】为10%。加入DMSO后迅速【sù】混匀，按每lml的数【shù】量分配到冻存管【guǎn】中，注意冻存 管做好【hǎo】标识。本【běn】公司【sī】按每个冻存管【guǎn】细胞数目大于【yú】1X106个细胞冻存。
将冻存管置于程序【xù】降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小【xiǎo】时以后转入液 氮灌【guàn】储存。记【jì】录冻【dòng】存管位【wèi】置以【yǐ】便下次拿取【qǔ】。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发现干【gàn】冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请【qǐng】立【lì】即与我们电联。
所有动物细【xì】胞【bāo】均视为有【yǒu】潜在的【de】生物危【wēi】害性，必须在二级生【shēng】物安全台内【nèi】操作，并请注意防护，所有废液及【jí】接触过此【cǐ】细胞的器皿需【xū】要灭【miè】菌后方能丢弃【qì】。
 
细胞特性：
1)来源：卵巢腺癌，腹水转移
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人卵巢癌细胞 (SK-0V-3)运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：
（1)干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；
（2)存活细【xì】胞，收到【dào】后应继续生长，传代达【dá】到细【xì】胞【bāo】生长状态良【liáng】好【hǎo】时，再进行冻存。
具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。