人皮肤黑色素瘤细胞（SK-MEL-1）

人皮肤黑色素瘤细胞(SK-MEL-1)
细胞介绍：
该【gāi】细胞【bāo】由【yóu】Oettgen F及其同事从一【yī】名29岁的患【huàn】有【yǒu】广泛、快速进展性【xìng】恶性黑【hēi】色素瘤 的白人男性患【huàn】者的胸导【dǎo】管中分离建立的。该细【xì】胞可【kě】产生黑色素【sù】，电镜检测【cè】发现细胞【bāo】中色素颗粒与【yǔ】自身【shēn】合成【chéng】和【hé】吞噬作用相关。在63%的恶【è】性黑色素瘤患者和10%其他疾病患者体内发现了针对该细胞系【xì】的抗体【tǐ】。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM-EBSS 培养【yǎng】基(Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle ’ s Balanced Salts) (MEM-EBSS))( MEM，GIBCO,添加 EBSS)，90%;
胎牛血清，10%
2.培养条件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄氏度，培养箱湿度为95%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现配【pèi】。液氮储存【cún】。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬【xuán】液的冻【dòng】存管在37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解冻【dòng】，加入4mL培养【yǎng】基【jī】混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃【qì】去上【shàng】清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞【bāo】悬液加入培养【yǎng】瓶【píng】中培养过夜【yè】（或将 细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第【dì】二天换液并检【jiǎn】查细胞密度。
 
人皮肤黑色素瘤细胞(SK-MEL-1)细胞传代：
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法【fǎ】一：收集细胞，1000RPM条【tiáo】件下离【lí】心【xīn】4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀，将细胞【bāo】悬【xuán】液按1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的【de】含8ml培养【yǎng】基的【de】新皿中或者瓶中。
方法二：可选择【zé】半数【shù】换液方式，弃去半数【shù】培养基【jī】后，将剩余细胞悬起，将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 3的比例分【fèn】到新的含【hán】8ml培养基【jī】的新【xīn】皿【mǐn】中或者瓶中。
细胞冻存：待【dài】细【xì】胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻存。悬【xuán】浮细【xì】胞冻存时，应将细【xì】胞收集，1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，少量【liàng】保存上清液（防止细【xì】胞吸走)，加入【rù】部分新鲜培养基，加入到【dào】冻存【cún】管中，在冻存管中加入10%DMSO 后进行【háng】冻存【cún】。
 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若【ruò】发现干冰己挥发【fā】干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及【jí】细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即与我们【men】电联。
所有动【dòng】物细胞【bāo】均视【shì】为有潜在的生【shēng】物危害性，必须【xū】在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废【fèi】液及接触过此细【xì】胞的【de】器皿需要灭【miè】菌【jun1】后方能【néng】丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：皮肤黑色素瘤
2)形态：球形，悬浮生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人皮肤黑色素瘤细胞(SK-MEL-1)运输和保存：可选【xuǎn】择干【gàn】冰运输【shū】及发送【sòng】复苏【sū】存活【huó】细【xì】胞方式：（1)干【gàn】冰【bīng】运输，收到后立即转入液氮冻【dòng】存或【huò】直接复苏；（2)存活细胞，收到后【hòu】应继续生【shēng】长，传代达到细【xì】胞生长状态良【liáng】好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。