原发性骨肉瘤细胞（SJSA-1）

原发性骨肉瘤细胞(SJSA-1)
细胞介绍：
SJSA-1细胞（原来称【chēng】为OsA-CL)建系于【yú】1982年，源【yuán】于一个诊断为原发性股骨【gǔ】骨【gǔ】肉瘤疾病【bìng】病人体【tǐ】内的肿【zhǒng】瘤。该细胞【bāo】含有编码p53相关蛋白的基因。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备DMEM培养基(GIBC0)，90%;胎牛血清【qīng】，10%; PS，1%。
2.培【péi】养条件：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温度【dù】：37摄【shè】氏度，培养箱湿度【dù】为70%-80%。
3.冻【dòng】存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复【fù】苏细胞：将【jiāng】含有【yǒu】lmL细【xì】胞悬【xuán】液【yè】的冻存管在37°C水【shuǐ】浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细【xì】胞悬【xuán】液加【jiā】入培养【yǎng】瓶中培养【yǎng】过夜（或【huò】将细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天换液并【bìng】检查细胞【bāo】密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
原发性骨肉瘤细胞(SJSA-1)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶【píng】中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然后【hòu】在显微【wēi】镜下【xià】观察细胞消化情况，若【ruò】细胞大【dà】部分变圆并脱【tuō】落，迅速拿回操作台【tái】，轻敲几下培【péi】养瓶后加【jiā】少量培养基【jī】终止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀后吸出【chū】，在1000RPM条【tiáo】件【jiàn】下离心4分【fèn】钟，弃去【qù】上清液【yè】，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的【de】比例分到【dào】新的含8ml培养基的新皿中或者【zhě】 瓶中。
细胞冻存：待细胞生【shēng】长【zhǎng】状态良【liáng】好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞冻存【cún】时，弃去培养【yǎng】基后【hòu】加【jiā】入少量胰酶，细【xì】胞变圆脱落后【hòu】，加【jiā】入约lml含血【xuè】清的培养基后加入冻存管中，再【zài】添加1〇%DMSO后【hòu】进行冻【dòng】存。
 
注意事项：
收到细【xì】胞后，若发现干冰己挥发干净【jìng】、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞【bāo】有【yǒu】污染【rǎn】，请立即【jí】与我们电联。
所【suǒ】有动物【wù】细胞【bāo】均【jun1】视为有潜【qián】在的生物【wù】危害性，必须在二级生物安【ān】全台内操作，并请注意防护，所【suǒ】有废液及接触过此细胞的【de】器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：原发性股骨骨肉瘤
2)形态：成纤维细胞，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
原发性骨肉瘤细胞(SJSA-1)运输和保存【cún】：使用含有胎牛血【xuè】清【qīng】的2ml冻存管发送存活【huó】细胞【bāo】。收到【dào】细胞后，可在1000RPM，常温条【tiáo】件【jiàn】下，离心5min后，于洁净操作台弃去【qù】上清，加入推【tuī】荐使用的培养【yǎng】基后转移至【zhì】l〇cm培养皿或者T25培【péi】养瓶【píng】中培养，传代达到细胞生长状态良好时【shí】，再进行冻存。具体【tǐ】操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。