膀胱移行细胞癌细胞（RT112）

膀胱移行细胞癌细胞(RT112)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八，丙酮【tóng】酸钠O.llg八)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培养条件：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻【dòng】存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液【yè】的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混【hún】合均【jun1】匀。在【zài】1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基后吹匀。然后将所【suǒ】有细胞悬【xuán】液加入培养【yǎng】瓶中培养过夜【yè】（或将【jiāng】细胞悬液【yè】加入l〇cm皿【mǐn】中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过【guò】夜）。第二天【tiān】换液并检查【chá】细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
膀胱移行细胞癌细胞(RT112)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上【shàng】清，用不含钙、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-21次【cì】。力【lì】口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养【yǎng】箱【xiāng】中消化9-21分钟，然后在显【xiǎn】微镜下【xià】观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆【yuán】并脱【tuō】落，迅速拿【ná】回操作【zuò】台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加少【shǎo】量培养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出【chū】，在【zài】1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1: 2到【dào】1: 5的比例【lì】分到【dào】新的含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细【xì】胞生长状态良好【hǎo】时，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细【xì】胞冻存【cún】时，弃去【qù】培【péi】养基后【hòu】加【jiā】入【rù】少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培【péi】养基【jī】后加入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后【hòu】进行冻存。
 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发【fā】现【xiàn】干冰【bīng】己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及细胞有污【wū】染，请立即与我们电【diàn】联。
所有【yǒu】动【dòng】物细胞【bāo】均视为有潜在的生物危害性【xìng】，必须在二级生物安全台内操【cāo】作，并请注意防护，所有废液及【jí】接触过【guò】此细胞的【de】器【qì】皿需要灭【miè】菌后方能丢【diū】弃。
 
细胞特性：
1)来源：膀胱癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
膀胱移行细胞癌细胞(RT112)运【yùn】输【shū】和【hé】保存：使用含【hán】有胎牛血清【qīng】的【de】2ml冻存管发送存活细胞。收【shōu】到细胞【bāo】后，可在1000RPM，常温【wēn】条件下，离心5min后【hòu】，于【yú】洁净操作台【tái】弃去上清【qīng】，加入推荐使用的培养基后转移至【zhì】l〇cm培养皿或者T25培养瓶中【zhōng】培养【yǎng】，传代达到细胞生长【zhǎng】状态良好时【shí】，再进行【háng】冻存。具体操作见细【xì】胞培养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。