人膀胱移行细胞rutou瘤细胞（RT4）

人膀胱移行细胞rutou瘤细胞(RT4)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 McCOY's 5A 培养基(McCOY's 5A，SIGMA,添加【jiā】 NaHC03 2.2g/L)，90%;胎牛血清【qīng】，10%。
2.培养条【tiáo】件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱【xiāng】湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻存【cún】液【yè】：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细【xì】胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液的冻存管在【zài】37°C水【shuǐ】浴中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基混合均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀【yún】。然后【hòu】将所有【yǒu】细胞【bāo】悬【xuán】液【yè】加入【rù】培养瓶中【zhōng】培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入【rù】约8ml培养【yǎng】基，培养过【guò】夜）。第二天换液并检查细胞密【mì】度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人膀胱移行细胞rutou瘤细胞(RT4)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗【xǐ】细【xì】胞9-21次。力【lì】口【kǒu】2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然后在显微镜下观察细【xì】胞消化情【qíng】况，若细【xì】胞大部分变【biàn】圆并脱落，迅【xùn】速拿回操作【zuò】台，轻敲【qiāo】几下培养瓶【píng】后加少【shǎo】量培养基终止消【xiāo】化【huà】。按6-8ml/瓶补【bǔ】加培养基，轻轻打匀【yún】后吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到【dào】新【xīn】的含8ml培养基的【de】新皿中或者瓶【píng】中。
 
3)细胞【bāo】冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴【tiē】壁细胞【bāo】冻存【cún】时，弃【qì】去【qù】培养基后【hòu】加入少量胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入约lml含血清的培养【yǎng】基后加入【rù】冻存【cún】管中，再【zài】添加1〇%DMSO后进【jìn】行冻存【cún】。
 
注意事项：
收【shōu】到【dào】细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请【qǐng】立【lì】即与我们【men】电联。
所有动【dòng】物细胞均视【shì】为有潜在【zài】的生物危害性【xìng】，必须在二级【jí】生物【wù】安全台内操作，并请注意防护，所有废液【yè】及接触过此细胞的器皿【mǐn】需【xū】要【yào】灭菌后【hòu】方【fāng】能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：膀胱移行细胞rutou瘤
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人膀胱移行细胞rutou瘤细胞(RT4)运输和保存：使用含有胎牛血清【qīng】的2ml冻存管发送【sòng】存活细胞。收到细【xì】胞后，可【kě】在1000RPM，常温【wēn】条件下，离【lí】心5min后，于洁【jié】净操作台弃【qì】去【qù】上清【qīng】，加入推荐使用的培养基后转移至l〇cm培养【yǎng】皿或者T25培【péi】养瓶中培养，传代达到细胞生【shēng】长【zhǎng】状态良好【hǎo】时【shí】，再进行冻存。具【jù】体【tǐ】操作见细【xì】胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。