人子宫内膜癌细胞（RL95-2）

人子宫内膜癌细胞(RL95-2)
细胞介绍：
该细胞系源【yuán】自一名65岁白人女性子【zǐ】宫【gōng】内膜腺【xiàn】癌组织，1983年由DL Way建系。该细胞表【biǎo】达a-角【jiǎo】蛋白，细胞表面具有微绒毛。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 DMEM/F12 培【péi】养【yǎng】基(DMEM/F12:GIBCO)，90%;胎【tāi】牛血清，10%。
2.培养条件【jiàn】：气相：空气【qì】，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37°C，培【péi】养箱湿度为【wéi】 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻存管迅速【sù】放入37°C水浴中（水面【miàn】要低【dī】于冻【dòng】存管盖部）摇【yáo】晃解冻，移入【rù】事【shì】先准备【bèi】好的含有4mL培养基的【de】15ml离心管【guǎn】中【zhōng】混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下【xià】离心4分钟，弃去上清液，加【jiā】入lmL培【péi】 养基后【hòu】吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液移【yí】入含【hán】有【yǒu】5ml培养基的培养【yǎng】瓶中培养过夜【yè】。第二【èr】天换液并检查细【xì】胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人子宫内膜癌细胞(RL95-2)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去培养上清，用不含钙【gài】、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力口【kǒu】2m丨消【xiāo】化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶【píng】中，置于37°C培养箱中消化9-21分钟，然【rán】后【hòu】在显【xiǎn】微镜下观察细胞【bāo】消化情况，若细胞【bāo】大部分变圆【yuán】并脱落【luò】，迅速【sù】拿回操作台，轻敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后加入【rù】3ml此细胞的 培【péi】养基【jī】终止消化。轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管【guǎn】中，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃【qì】去上清液【yè】，加入lmL培养液【yè】后吹匀。移入到事先【xiān】准备好的含有【yǒu】5ml培养基的T-25培养【yǎng】瓶中或含有14ml培养基的T-75培【péi】养瓶中培养。 

细胞冻存：待细【xì】胞生长状【zhuàng】态良好【hǎo】时，可【kě】进【jìn】行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理【lǐ】并【bìng】进行细胞计数。消化方法按照细胞传【chuán】代【dài】方法的9-21步【bù】骤【zhòu】进行，后的重【chóng】悬液使用血清。悬浮细胞直接计数【shù】后【hòu】离心【xīn】，用【yòng】血清重悬浮，加【jiā】DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后迅速【sù】混【hún】匀，按每lml的数量分配【pèi】到【dào】冻【dòng】存管中。本公司【sī】按每【měi】个冻存管细【xì】胞数目大于1X106个细胞冻存。 

注意事项：
收【shōu】到【dào】细胞【bāo】后，若【ruò】发现干【gàn】冰己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危【wēi】害性，必须在二级生【shēng】物安【ān】全台【tái】内操作，并【bìng】请注意防【fáng】护【hù】，所有废【fèi】液及接触过此细【xì】胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。

 细胞特性：
1)来源：子宫内膜腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人子宫内膜癌细胞(RL95-2)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认【rèn】细胞生长【zhǎng】状态，去掉封口膜并【bìng】将T25瓶置于【yú】37°C培养约【yuē】2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细【xì】胞长【zhǎng】满（90%以【yǐ】上）请及时进行细【xì】胞传代，传代培养【yǎng】用6ml本公【gōng】司附带的*培养基。
5.接到细胞【bāo】次日，请检查细胞【bāo】是否污染【rǎn】，若【ruò】发现污染或疑似污染，请及时与我【wǒ】们【men】取【qǔ】得电联。
细胞用途：仅供使用。