人肺癌细胞（PC9）

人肺癌细胞(PC9)
细胞介绍：
这是一株肺癌细胞，具有EGFR19位外显子突变。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，90%;北美胎牛血【xuè】清 (United States，GIBCO)，10%。
2.培养条【tiáo】件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿度为70%-80%。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现【xiàn】配。液【yè】氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞：将含有lmL细胞悬【xuán】液【yè】的冻存【cún】管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培【péi】养基【jī】混合均匀。在【zài】1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃【qì】去上清液【yè】，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将【jiāng】所有【yǒu】细【xì】胞悬液加入培养瓶中培【péi】养【yǎng】过【guò】夜（或将细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肺癌细胞(PC9)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗细胞【bāo】9-21次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消【xiāo】化9-21分钟，然后在【zài】显微镜下观察【chá】细胞【bāo】消化情【qíng】况，若细胞【bāo】大部【bù】分变圆并脱落，迅速拿回操作【zuò】台，轻敲几下培养瓶后加少量培养【yǎng】基终【zhōng】止消【xiāo】化。按6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件【jiàn】下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀【yún】。将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到新的含8ml培【péi】养基的新皿中或【huò】者瓶【píng】中。

 
细胞【bāo】冻存：待细胞生长状态【tài】良好时，可进【jìn】行【háng】细胞冻存。贴壁细胞【bāo】冻存时，弃去培养基后加入【rù】少【shǎo】量胰酶，细胞【bāo】变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后【hòu】加入冻存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进【jìn】行【háng】冻存。

 
注意事项：
收到细【xì】胞【bāo】后，若发现干【gàn】冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污【wū】染【rǎn】，请立即与我【wǒ】们电【diàn】联。
所有动物细胞均视为有潜【qián】在的生物【wù】危害性【xìng】，必须在二级【jí】生【shēng】物安全台内操作，并【bìng】请注【zhù】意防护，所有废液及接触【chù】过【guò】此细胞【bāo】的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺癌细胞(PC9)运输和保存：使【shǐ】用含有胎牛血清的2ml冻存管发【fā】送存【cún】活细胞。收【shōu】到细胞后， 可在1000RPM，常温【wēn】条【tiáo】件下【xià】，离心5min后，于洁净操作台弃【qì】去【qù】上清，加【jiā】入推荐使【shǐ】用的培养基【jī】后【hòu】转移至l〇cm培养皿【mǐn】或【huò】者T25培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。