人胰腺癌细胞（PC3）

人胰腺癌细胞(PC3)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备F-12K培养【yǎng】基（F-12K : GIBCO);北美胎牛血清【qīng】，10%; PS 1%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳【tàn】，5%。温【wēn】度：37摄氏【shì】度，培养箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1. 复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞【bāo】悬液【yè】的冻存管【guǎn】在【zài】37°C水浴中【zhōng】迅速摇晃解【jiě】冻，加入4mL培养基混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液，补加【jiā】l-2mL培养基后吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬液加【jiā】入【rù】培养瓶中培养【yǎng】过夜（或将细胞悬液【yè】加入l〇cm皿中【zhōng】，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2.细胞传代【dài】：如【rú】果细【xì】胞密度达80%-90%，即可进【jìn】行传代培养。
 
人胰腺癌细胞(PC3)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清【qīng】，用不含【hán】钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于37°C培养箱中消化9-21分钟【zhōng】，然后在显微【wēi】镜下观察【chá】细胞【bāo】消【xiāo】化情况，若细胞大部分变【biàn】圆并【bìng】脱落，迅【xùn】速拿【ná】回操作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加少量培养【yǎng】基【jī】终【zhōng】止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培养基【jī】，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心【xīn】4分【fèn】钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养液后吹【chuī】匀。将细胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的比例分到新的含【hán】8ml培养基的新皿【mǐn】中【zhōng】或者瓶中。

3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细【xì】胞【bāo】冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底9-21次后加入lml胰酶，细胞变【biàn】圆【yuán】脱落后，加入2ml*培养基终止消【xiāo】化，可使用血球计数板计【jì】数【shù】。1000RPM离心5分钟去掉上【shàng】清。用血【xuè】清重悬【xuán】浮，加DMSO至终浓度【dù】为10%。加入DMSO后迅速混【hún】匀，按每lml的数【shù】量分配到冻存【cún】管中，注【zhù】意冻存管做【zuò】好【hǎo】标识。本【běn】公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞【bāo】冻存。将冻存【cún】管置于程序降温【wēn】盒【hé】中【zhōng】，放入-80度【dù】冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记【jì】录冻存管【guǎn】位【wèi】置以【yǐ】便下次拿取。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发【fā】干【gàn】净、冻【dòng】存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染，请立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有【yǒu】动物细胞均视为有潜【qián】在【zài】的生物危害性【xìng】，必须在二级生物安全【quán】台内操作【zuò】，并请注意防护，所【suǒ】有【yǒu】废液及接触【chù】过此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：胰腺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胰腺癌细胞(PC3)运输和【hé】保存：使用T25瓶充液发【fā】送活细胞。收【shōu】到细胞后【hòu】，请先在【zài】显【xiǎn】微镜下检查细胞生【shēng】长状态，并【bìng】将【jiāng】T25瓶置于培养箱约6h或过夜后，再次检【jiǎn】查细胞状态。若状【zhuàng】态【tài】良好，可进行细胞后续处【chù】理操作，按照以下方式进【jìn】行【háng】。若发【fā】现可疑污染物，请及时与我们取【qǔ】得电联。

细胞用途：仅供使用。