人前列腺癌细胞（PC-3M）

人前列腺癌细胞(PC-3M)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培【péi】养基(RPMI-1640:GIBCO)，90%;胎牛【niú】血清，10%。
2. 培养条件：气相：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度【dù】为70%-80%。
3.冻存液【yè】：90%*培养基【jī】，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存【cún】。
 
2)细胞处理
复苏细胞：将含有lmL细【xì】胞【bāo】悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇【yáo】晃解冻，加入4mL培养基混合均【jun1】匀【yún】。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心【xīn】4分【fèn】钟，弃【qì】去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹匀。然后将所有细【xì】胞悬液加入【rù】培养瓶中【zhōng】培养过夜（或【huò】将细胞悬【xuán】液加入【rù】l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人前列腺癌细胞(PC-3M)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用【yòng】不含钙【gài】、镁【měi】离子的PBS润洗细胞9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养【yǎng】箱中消化9-21分钟，然后在【zài】显微镜【jìng】下【xià】观察细胞【bāo】消【xiāo】化情况，若【ruò】细胞大部分变圆【yuán】并脱落，迅速拿【ná】回操【cāo】作台，轻敲几下培养瓶后加少【shǎo】量【liàng】培养基终止消【xiāo】化。按【àn】6-8ml/瓶补加【jiā】培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去上清【qīng】液，补加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将【jiāng】细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的【de】比例分【fèn】到新【xīn】的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

 
3)细胞冻存：待【dài】细胞生长状态良好时【shí】，可进行细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻存时，弃【qì】去培养基【jī】后【hòu】加【jiā】入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后【hòu】加【jiā】入冻存管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进【jìn】行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发【fā】现干冰己挥发干净、冻【dòng】存管瓶盖脱落、破损【sǔn】及细胞有【yǒu】污染，请【qǐng】立【lì】即与我们【men】电联。
所有动物细胞均【jun1】视为有潜在的生物【wù】危害性，必须在【zài】二【èr】级生物安全台内【nèi】操【cāo】作，并请注意防护，所有【yǒu】废液及接触过此细【xì】胞的【de】器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人前列腺癌细胞(PC-3M)运输【shū】和保存：使用含有胎牛血清的2ml冻存【cún】管发【fā】送存活细胞。收到细胞【bāo】后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁【jié】净操【cāo】作台弃去上清，加入推【tuī】荐使用的培养基后【hòu】转移至l〇cm培养皿【mǐn】或者【zhě】T25培养【yǎng】瓶中培养，传代达到细胞【bāo】生长状态良好时【shí】，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。