人卵巢癌细胞（OV-90）

人卵巢癌细胞(OV-90)
细胞介绍：
该细【xì】胞【bāo】系来源于一位法国白人【rén】患者，患者没【méi】有【yǒu】卵巢癌【ái】家族史。建系于1992年。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 MEM 培养基(MEM:GIBCO);北美胎牛血【xuè】清(United States， GIBCO)，15%;双【shuāng】抗 1%。
2.培养【yǎng】条【tiáo】件：气【qì】相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
1. 复苏【sū】细【xì】胞：将含有lmL细【xì】胞【bāo】悬液的冻【dòng】存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养【yǎng】基混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然【rán】后将所有细【xì】胞悬【xuán】液加入【rù】培【péi】养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2.细胞传代：如果细【xì】胞密【mì】度达【dá】80%-90%，即可进行传代培养。
 
人卵巢癌细胞(OV-90)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清【qīng】，用不【bú】含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-21次。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶中【zhōng】，置于37°C培养箱【xiāng】中【zhōng】消化【huà】9-21分钟，然后在显微镜下观【guān】察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱【tuō】落【luò】，迅速拿回操【cāo】作台【tái】，轻敲几下培养瓶【píng】后加【jiā】少量培【péi】养基终止消化【huà】。按【àn】6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀【yún】后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养【yǎng】液后吹匀。将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分【fèn】到【dào】新的含8ml培【péi】养基的新皿【mǐn】中或者【zhě】瓶中。

3.细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞【bāo】冻存时，弃去培养基后，PBS清【qīng】洗瓶底9-21次后加入lml胰酶【méi】，细【xì】胞变圆脱【tuō】落后，加入【rù】2ml*培养【yǎng】基终止消【xiāo】化，可使【shǐ】用【yòng】血球计数板计数。1000RPM离心5分钟去掉【diào】上【shàng】清。用血清重悬【xuán】浮，加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后【hòu】迅【xùn】速【sù】混匀，按每lml的【de】数【shù】量分配到冻存管中，注意冻存管【guǎn】做好标识【shí】。本公【gōng】司【sī】按每个冻存管细【xì】胞数目【mù】大于1X106个细胞冻存【cún】。将冻【dòng】存管置于【yú】程序降温盒中，放入-80度【dù】冰箱，至【zhì】少2个小时以后转入液【yè】氮灌储存。记录【lù】冻存管位置以便下次拿取。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及细【xì】胞【bāo】有污染【rǎn】，请【qǐng】立即【jí】与我【wǒ】们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在的【de】生物危害性，必须在二【èr】级生物安全【quán】台内操作，并请注意【yì】防护【hù】，所有废【fèi】液及接触过此细【xì】胞的【de】器皿需【xū】要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：卵巢；腹水转移
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人卵巢癌细胞(OV-90)运输和保存：使用T25瓶充液发【fā】送活细胞【bāo】。收到【dào】细胞后，请先在显微镜下检查细【xì】胞生长【zhǎng】状态，并将【jiāng】T25瓶置于培养【yǎng】箱【xiāng】约【yuē】6h或过夜后，再次检查细胞状态。若【ruò】状态良好【hǎo】，可【kě】按照以下细【xì】胞培养步骤进行细【xì】胞后续【xù】处【chù】理【lǐ】操作。若发现可疑【yí】污染物，请及时与我们取得电联。

细胞用途：仅供使用。