人胃癌细胞（NCI-N87）

人胃癌细胞(NCI-N87)
细胞介绍：
NCI-N87细【xì】胞表【biǎo】达【dá】表面糖蛋【dàn】白癌胚抗原【yuán】(CEA)和TAG 72,并且没有左【zuǒ】旋多巴胺脱羧【suō】 酶(DDC)活性。它们的血【xuè】管活性【xìng】的肠肽(VIP)受体活【huó】性【xìng】极低并【bìng】缺【quē】乏胃泌激素受体【tǐ】。它们表达蕈毒碱胆碱【jiǎn】受体。没有证【zhèng】据表明存在【zài】N-myc, L-myc, myb和EGF受体基因的重组。这个细胞株【zhū】表达的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平与其它【tā】细胞【bāo】株相当。以【yǐ】下基因不表达:N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2,或胃泌激素释【shì】放肽。据报道NCI-N87细胞的植板率为4.3%。

细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC031.5g八【bā】, D-葡【pú】萄糖【táng】2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养【yǎng】条件【jiàn】：气相：空气，95%;二【èr】氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度。
3.冻存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液【yè】氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬液的冻存管【guǎn】在【zài】37°C水浴中迅速摇晃解冻，加 入4mL培养基混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，补加l-2mL培养基【jī】后吹匀。然【rán】后将所有细胞悬【xuán】液加入培养【yǎng】瓶中【zhōng】培养过夜（或将 细【xì】胞悬【xuán】液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胃癌细胞(NCI-N87)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细【xì】胞9-21次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-21分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微镜【jìng】下观察细胞消化【huà】情况，若【ruò】细胞大部 分变【biàn】圆并脱落，迅速【sù】拿【ná】回操作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后【hòu】加少量培养基终止消化【huà】。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻【qīng】轻【qīng】打匀后吸出，在1000RPM条件下离【lí】心【xīn】4分 钟，弃去【qù】上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬【xuán】液【yè】按1: 2到1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到新的含8ml培养基的新【xīn】皿中或者中。

 
细胞冻存：待细胞生长状【zhuàng】态良好时【shí】，可进行细胞冻【dòng】存。贴壁细【xì】胞冻【dòng】存时，弃【qì】去培养基后加【jiā】入少量【liàng】胰酶，细胞变圆脱落后【hòu】，加入约lml含血清的培养基后 加入冻存【cún】管中【zhōng】，再【zài】添【tiān】加1〇%DMSO后进行【háng】冻存。

 
注意事项：
收到细胞后【hòu】，若发现干【gàn】冰【bīng】己挥【huī】发干净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污染，请【qǐng】立即与我们电【diàn】联。
所有动物细胞均视为有潜在【zài】的生物危害性【xìng】，必须在【zài】二级【jí】生【shēng】物安【ān】全台内操作，并【bìng】请注意防护，所有废液及接【jiē】触过此细胞的器【qì】皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：胃癌，肝转移
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胃癌细胞(NCI-N87)运输【shū】和【hé】保存：使用【yòng】含有【yǒu】胎牛血【xuè】清的2ml冻存管发送【sòng】存活【huó】细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件【jiàn】下，离心5min后，于洁净操【cāo】作台弃去【qù】上清，加入推荐使用的【de】培养基后转移【yí】至l〇cm培养皿或【huò】者T25培养瓶中培养，传代【dài】达到【dào】细【xì】胞生长状态【tài】良好时【shí】，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供使用。