人肺癌细胞（NCI-H3255）

人肺癌细胞(NCI-H3255)
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养【yǎng】基(RPIVM-1640:GIBCO,添【tiān】加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖【táng】2.5g八【bā】，丙酮【tóng】酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养条件：气相【xiàng】：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培【péi】养箱湿度为【wéi】70%-80%。
3.冻【dòng】存【cún】液：90%*培养基，10%DMSO,现【xiàn】用现【xiàn】配。液氮储存。
 
2)细胞处理： 
复苏细胞：将含有lmL细胞【bāo】悬液【yè】的冻存管在【zài】37°C水浴【yù】中【zhōng】迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件【jiàn】下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后【hòu】吹【chuī】匀。然后将所有细胞悬【xuán】液【yè】加入【rù】培养瓶中培养过夜【yè】（或将 细胞【bāo】悬液加【jiā】入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人肺癌细胞(NCI-H3255)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培【péi】养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗【xǐ】细胞9-22次。力口2m丨消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置【zhì】于【yú】37°C培养箱中消化9-22分【fèn】钟，然后在显【xiǎn】微【wēi】镜下观【guān】察【chá】细胞【bāo】消化情况，若细胞大部 分变【biàn】圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养【yǎng】瓶后加少量【liàng】培【péi】养基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加培养【yǎng】基，轻【qīng】轻打匀【yún】后吸出【chū】，在1000RPM条件下离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹【chuī】匀。将细【xì】胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分【fèn】到【dào】新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 

细胞冻存：待【dài】细胞生长状态【tài】良好时，可进【jìn】行细胞冻存。贴壁【bì】细胞冻【dòng】存时，弃去培【péi】养基【jī】后加入少量胰酶，细胞变圆脱【tuō】落后，加入约【yuē】lml含血清的培养基后 加入冻存【cún】管中，再添加1〇%DMSO后【hòu】进【jìn】行冻【dòng】存。 

注意事项：
收到【dào】细胞后，若发现干冰己【jǐ】挥发干净【jìng】、冻存【cún】管瓶盖脱落、破【pò】损及细胞有污染【rǎn】，请立即与我们电联。
所有动【dòng】物细胞均视为有潜在的【de】生物危【wēi】害性，必须在二级生【shēng】物【wù】安【ān】全台内操作，并请注意防【fáng】护，所有废液及接触过此细【xì】胞的器皿【mǐn】需【xū】要灭菌后方能丢弃。

细胞特性：
1)来源：肺癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺癌细胞(NCI-H3255)运输和保存：使用含有胎牛【niú】血【xuè】清的【de】2ml冻存管发送【sòng】存活细【xì】胞。收【shōu】到细胞后，可在【zài】1000RPM，常【cháng】温条件下，离心5min后，于洁净操作台【tái】弃去上清【qīng】，加入推荐使【shǐ】用的培养基【jī】后转移【yí】至【zhì】l〇cm培养皿或者T25培养瓶中培【péi】养，传代【dài】达【dá】到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。细胞用途：仅供使用。