人肺腺癌细胞（NCI-H1975）

人肺腺癌细胞(NCI-H1975)
细胞介绍：
这株细胞于1988年七月建株，组织提供者是一位非吸烟人士。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPIVM-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八【bā】)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培养条件：气【qì】相【xiàng】：空气，95%;二氧【yǎng】化碳，5%。温度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用【yòng】现【xiàn】配。液氮储【chǔ】存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有【yǒu】lmL细胞悬液的冻【dòng】存管【guǎn】在37°C水【shuǐ】浴中迅速摇晃【huǎng】解冻，加【jiā】入4mL培【péi】养基混合【hé】均匀。在1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培【péi】养基后吹【chuī】匀【yún】。然后将所有【yǒu】细【xì】胞悬液加入培养瓶中培养【yǎng】过夜（或【huò】将 细【xì】胞悬液加入l〇cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。细胞传代：如果细胞密度80%-90%,即可进行传代培养。

 
人肺腺癌细胞(NCI-H1975)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养【yǎng】上清，用【yòng】不含钙、镁离【lí】子的PBS润洗细【xì】胞9-22次。力口2m丨消化液【yè】（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中，置于37°C培【péi】养箱中消化9-22分【fèn】钟，然后在显微镜下观察细胞消化【huà】情况，若细胞【bāo】大【dà】部 分变圆并脱落【luò】，迅【xùn】速【sù】拿回操作【zuò】台【tái】，轻敲几下培养瓶后加少【shǎo】量培养【yǎng】基终【zhōng】止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻【qīng】轻打匀后【hòu】吸出，在1000RPM条【tiáo】件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将细胞悬液按【àn】1: 2到1: 5的比【bǐ】例分到新的【de】含8ml培【péi】养基【jī】的新皿中或者瓶【píng】中。

 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集【jí】细【xì】胞【bāo】，1000RPM条件下离心4分【fèn】钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL 培【péi】养液后吹匀，将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到【dào】新的含8ml培养基的 新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去【qù】半数培【péi】养基后，将剩【shèng】余细胞悬起，将细 胞悬液按1: 2到【dào】1: 3的比【bǐ】例分到新的【de】含8ml培【péi】养基的新皿中或者瓶中。

细胞【bāo】冻存【cún】：待细胞生长状态良好时，可【kě】进【jìn】行细【xì】胞【bāo】冻存。贴【tiē】壁细胞冻存时，弃去培养基后加【jiā】入少量胰酶，细【xì】胞变【biàn】圆脱落后，加入约lml含血清的培养基后加【jiā】入冻存管中，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存【cún】。悬【xuán】浮【fú】细【xì】胞冻存时，应将【jiāng】细胞 收集，1000RPM条件下离【lí】心4分钟，少【shǎo】量保存上清液【yè】（防止细胞吸【xī】走)，加 入部分新【xīn】鲜培养基，加入到冻【dòng】存管中，在冻存管中加【jiā】入1〇%DMSO后进【jìn】行冻存。

 
注意事项：
收到【dào】细胞后，若发【fā】现【xiàn】干冰己挥发【fā】干【gàn】净、冻存管瓶盖脱落【luò】、破损及细胞有污【wū】染，请立即与我们电联【lián】。
所有动物细胞均视为有潜在的生【shēng】物危害【hài】性【xìng】，必须在二【èr】级【jí】生【shēng】物安全【quán】台内操作，并请注意防【fáng】护，所有废液【yè】及【jí】接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：器官：肺疾病：腺癌；非小细胞肺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌细胞(NCI-H1975)运输【shū】和保存：可【kě】选择干冰运输及发送复【fù】苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后立即【jí】转【zhuǎn】入液氮【dàn】冻存或直【zhí】接复苏；（2)存活细胞【bāo】，收到后应【yīng】继续【xù】生【shēng】长，传代达到细胞生长状态良好【hǎo】时，再进行冻存。具体操【cāo】作见细【xì】胞培养【yǎng】步骤。

细胞用途：仅供使用。