人肺腺癌细胞（NCI-H1395）

人肺腺癌细胞(NCI-H1395)
 
细胞介绍：
这株细胞是1986年【nián】4月建株的。患者吸烟，每年15包【bāo】。ATCC CRL-5957是一株来源于同一患者的【de】类淋巴【bā】母【mǔ】细胞。
 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备【bèi】 RPIVM-1640 培养基(RPIVM-1640:GIBCO,添加【jiā】 NaHC03 1.5g/L, D-葡【pú】萄糖2.5g八，丙酮酸钠O.llg八)，90%;胎牛血清，10%。

2. 培【péi】养条件：气相：空气【qì】，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度：37摄氏度，培养【yǎng】箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养【yǎng】基，10%DMSO,现用现配。液氮【dàn】储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速【sù】摇晃解冻，加入【rù】4mL培养基混合均匀。在1000RPM条【tiáo】件下【xià】离心4分钟【zhōng】，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀【yún】。然后将所【suǒ】有细胞悬液加【jiā】入培【péi】养瓶中培【péi】养过夜【yè】（或【huò】将 细胞【bāo】悬液加入l〇cm皿中，加【jiā】入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁【měi】离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-22次【cì】。力口2m丨【shù】消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培【péi】养瓶中【zhōng】，置于【yú】37°C培养箱中消化9-22分【fèn】钟，然后在显微【wēi】镜下观察细胞消化【huà】情况，若【ruò】细胞大【dà】部 分变圆并脱落，迅【xùn】速拿回【huí】操【cāo】作台，轻敲几【jǐ】下培养瓶后加少量培养【yǎng】基终止消化。按6-8ml/瓶补加培【péi】养基，轻轻打匀后【hòu】吸出，在【zài】1000RPM条件下离心4分钟，弃【qì】去【qù】上清液，补加l-2mL培养【yǎng】液后吹匀。将细胞【bāo】悬液按【àn】1: 2到1: 5的比例分到新【xīn】的含8ml培【péi】养【yǎng】基【jī】的新皿中或者瓶中。

 
人肺腺癌细胞(NCI-H1395)对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方【fāng】法【fǎ】一：收【shōu】集细胞，1000RPM条件下离【lí】心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL 培养液后吹【chuī】匀【yún】，将【jiāng】细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方【fāng】法二：可选【xuǎn】择半数【shù】换液方【fāng】式，弃去半数培养基后【hòu】，将剩【shèng】余【yú】细胞【bāo】悬起，将 胞悬液按1: 2到1: 3的比【bǐ】例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

 
细胞冻存：待【dài】细胞生【shēng】长【zhǎng】状态良好时，可进行细胞冻【dòng】存。贴【tiē】壁细胞【bāo】冻【dòng】存时，弃 去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆【yuán】脱落后，加入约【yuē】lml含血清的培养【yǎng】基后 加入冻存【cún】管中【zhōng】，再添加【jiā】1〇%DMSO后进行冻存【cún】。悬浮细胞【bāo】冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液【yè】（防止【zhǐ】细胞【bāo】吸【xī】走)，加【jiā】 入部分新【xīn】鲜培养基，加入到冻存管【guǎn】中，在冻存管【guǎn】中加入1〇%DMSO后进行冻存。

 
注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干【gàn】净、冻【dòng】存【cún】管瓶盖脱落【luò】、破损及【jí】细胞有污染【rǎn】，请【qǐng】立即与【yǔ】我们电联。
所有动物细胞均视【shì】为有潜在的生物危害性，必【bì】须在二级生物【wù】安全台内操作，并请【qǐng】注【zhù】意防护，所有【yǒu】废液及接【jiē】触过【guò】此细胞的器【qì】皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肺腺癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人肺腺癌细胞(NCI-H1395)运输【shū】和保存【cún】：可【kě】选择干冰运输及【jí】发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输【shū】，收到后【hòu】立即转入【rù】液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞【bāo】

，收到【dào】后应继续【xù】生长【zhǎng】，传代达到细胞生长状态良好时，再【zài】进【jìn】行冻【dòng】存。具体操作见【jiàn】细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。