人胚肺细胞 （MRC-5）

人胚肺细胞 (MRC-5)
细胞介绍：
MRC-5细胞系【xì】来【lái】自14周龄【líng】男性胎儿的正常肺组织，该细胞老化前能传代【dài】42到46次【cì】群【qún】体倍增。它【tā】是正常二倍体细胞系，46, XY核型。模式染色体数为46,概率为70%。

 
细胞培养步骤：
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准【zhǔn】备 MEM 培养基(MEM:GIBCO)，北美【měi】胎牛血清(United States， GIBCO)，15%，1% PS。
2. 培【péi】养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化碳，5%。温【wēn】度【dù】：37摄氏度，培养箱湿【shī】度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏【sū】细胞【bāo】：将含有lmL细胞悬【xuán】液【yè】的冻存管在37°C水浴【yù】中迅【xùn】速摇晃解冻，加入【rù】4mL培养【yǎng】基混合均匀。在【zài】1000RPM条件下【xià】离心4分钟，弃去【qù】上清液，补【bǔ】加l-2mL培【péi】养基后吹【chuī】匀。然【rán】后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬【xuán】液加入l〇cm皿【mǐn】中，加入约【yuē】8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胚肺细胞 (MRC-5)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃【qì】去【qù】培养【yǎng】上清，用不含【hán】钙、镁离子【zǐ】的PBS润洗细胞9-22次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在显微镜下【xià】观察细胞消化情况，若细胞【bāo】大部分【fèn】变圆并【bìng】脱落，迅速【sù】拿回【huí】操【cāo】作台，轻敲【qiāo】几【jǐ】下培养瓶后加【jiā】少量培养基终止消【xiāo】化。按【àn】6-8ml/瓶【píng】补【bǔ】加培养基，轻【qīng】轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液【yè】，补加l-2mL培养液【yè】后吹匀。将细胞悬【xuán】液按【àn】1: 2到1: 5的比例【lì】分【fèn】到新的【de】含【hán】8ml培养基的新皿中或者瓶【píng】中。

 
细胞冻存：待【dài】细胞生长【zhǎng】状态良好时，可【kě】进行细胞冻存【cún】。贴壁【bì】细胞冻存时，先要消化处理并【bìng】进【jìn】行细胞【bāo】计数。消化方法按照细【xì】胞传代【dài】方【fāng】法的9-22步骤进行【háng】，后【hòu】的重悬液使用血清。悬浮【fú】细胞直接计数后离【lí】心，用血清重【chóng】悬浮，加DMSO 至终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀【yún】，按【àn】每lml的数量分配到【dào】冻存管中。本公司按每【měi】个【gè】冻存管【guǎn】细胞数目大于【yú】1X106个细胞冻存。收到【dào】细胞后，若发现【xiàn】干冰己挥发干【gàn】净、冻存管瓶【píng】盖【gài】脱落、破损及【jí】细胞有污【wū】染，请立即与我们电【diàn】联。所有动物细胞均视为有潜在的生物【wù】危害性【xìng】，必须在二级生物安【ān】全台内【nèi】操作，并【bìng】请注意防【fáng】护，所有废液及接触过此细胞的【de】器皿需要灭菌【jun1】后方【fāng】能丢弃。

 
注意事项:
收到细胞后，若发【fā】现干冰己挥发干净【jìng】、冻存管瓶盖脱【tuō】落、破损及【jí】细胞有污【wū】染，请【qǐng】立即与我【wǒ】们电联【lián】。
所【suǒ】有【yǒu】动物细胞均视为【wéi】有潜【qián】在的生【shēng】物危害性，必须在二级生物安全台【tái】内操作【zuò】，并请注意防【fáng】护，所有废液【yè】及接触过此细胞的器皿【mǐn】需

要灭菌后方能丢弃。
 
细胞特性：
1)来源：肺
2)形态：成纤维细胞
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胚肺细胞 (MRC-5)运输和保存：可选【xuǎn】择【zé】干冰运【yùn】输及发送【sòng】复【fù】苏存活细胞方式【shì】：（1)干冰【bīng】运输，收到后立即转入液氮【dàn】冻存或直接复苏；（2)存活【huó】细胞

，收到【dào】后应继【jì】续生【shēng】长，传代达到细胞生长【zhǎng】状态良好时，再进行冻存。具体操作【zuò】见细胞培【péi】养步骤【zhòu】。
细胞用途：仅供使用。