人胃癌细胞 （MKN-45）

人胃癌细胞 (MKN-45)
细胞介绍：
该细胞系【xì】由SAkiyama建立，源于一【yī】位35岁【suì】患有印【yìn】戒细胞【bāo】癌的【de】女性的胃淋巴结。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备【bèi】 RPIVM-1640 培养基【jī】(RPMI-1640:GIBCO,添加 NaHC03 1.5g/L, D-葡萄【táo】糖2.5g八，丙酮【tóng】酸钠O.llg八)，80%;胎牛血清，20%。

2.培【péi】养条件：气相【xiàng】：空气，95%;二氧化【huà】碳，5%。温【wēn】度：37°C，培养箱【xiāng】湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理： 
复苏细【xì】胞【bāo】：将含有lmL细【xì】胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴【yù】中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻【dòng】，移入事【shì】先准备【bèi】好【hǎo】的含有【yǒu】4mL培养【yǎng】基的15ml离【lí】心管中【zhōng】混合【hé】均匀【yún】。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加【jiā】入【rù】lmL培【péi】 养基【jī】后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含【hán】有【yǒu】5ml培养基的培养瓶中培【péi】养过【guò】夜。第二天换【huàn】液并检查细胞【bāo】密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
人胃癌细胞 (MKN-45)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞【bāo】9-22次。力【lì】口2m丨【shù】消化【huà】液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养【yǎng】瓶【píng】中【zhōng】，置于37°C培养箱中消化9-22分钟，然后在显微镜下观【guān】察细胞【bāo】消化【huà】情况，若细胞【bāo】大部【bù】分变圆并脱落，迅速拿【ná】回【huí】操【cāo】作台，轻敲几【jǐ】下培养【yǎng】瓶后加入3ml此细【xì】胞的【de】培【péi】养基终止【zhǐ】消化。轻轻吹打后吸【xī】出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分【fèn】钟【zhōng】，弃去上【shàng】清液，加入【rù】lmL培养液后吹【chuī】匀。移入到事先准备好的含【hán】有5ml培【péi】养基的T-25培养瓶【píng】中或含有14ml培养【yǎng】基的T-75培养瓶【píng】中培养。

 
细胞冻存：待细【xì】胞生【shēng】长状态良【liáng】好【hǎo】时，可进行细【xì】胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并【bìng】进行【háng】细胞计数。消化方法【fǎ】按照细胞传代方【fāng】法的9-22步骤进行，后【hòu】的【de】重悬【xuán】液使用血清。悬浮细胞直接计数后离【lí】心【xīn】，用血【xuè】清重悬浮，加DMSO 至终浓【nóng】度为10%。加入DMSO后迅速【sù】混【hún】匀，按每lml的【de】数量分配到冻存【cún】管中。本公司按每个冻存管【guǎn】细【xì】胞【bāo】数目大于【yú】1X106个细胞冻存。

 
注意事项：
收【shōu】到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及细【xì】胞有污染【rǎn】，请立即【jí】与我们电联【lián】。
所有动物细胞均视为有潜在【zài】的生物危害性，必须在【zài】二级生【shēng】物安全【quán】台【tái】内操作【zuò】，并请注意防【fáng】护，所有废液及【jí】接触过此细胞的器皿【mǐn】需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：胃癌
2)形态：圆形，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
人胃癌细胞 (MKN-45)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微【wēi】镜下【xià】确认【rèn】细【xì】胞生长状态，去掉【diào】封口膜并将T25瓶置于37°C培养【yǎng】约 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞【bāo】长满【mǎn】（90%以上）请及时【shí】进行细胞传【chuán】代，传代培养用6ml本公司附带的【de】*培养【yǎng】基。
5.接到细胞【bāo】次日，请检查细胞是否污染【rǎn】，若【ruò】发现污染或疑似污染，请【qǐng】及时【shí】与【yǔ】我们取得电联。
细胞用途：仅供使用。