低转移人肝癌细胞（MHCC97-L）

低转移人肝癌细胞(MHCC97-L)
细胞介绍：
该细胞来源于中山医院，生长较缓慢。
 
本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO)，90%;北美胎牛血清 (United States，GIBCO)，10%。
2. 培【péi】养条【tiáo】件【jiàn】：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为 70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
 
2)细胞处理：
复苏细胞：将含【hán】有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中（水面【miàn】要低于冻存管盖部）摇晃【huǎng】解冻，移【yí】入事先准【zhǔn】备【bèi】好的【de】含有【yǒu】4mL培【péi】养基的【de】15ml离【lí】心管中混合均【jun1】匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去【qù】上清【qīng】液，加入lmL培 养基后吹【chuī】匀。然【rán】后将所【suǒ】有细胞悬【xuán】液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养【yǎng】过夜。 第二天换液并检【jiǎn】查【chá】细胞密【mì】度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
低转移人肝癌细胞(MHCC97-L)对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上【shàng】清，用不含钙、镁离子【zǐ】的【de】PBS润【rùn】洗细胞9-22次。力【lì】口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于【yú】培【péi】养瓶中，置于37°C培养箱中【zhōng】消化9-22分钟，然后【hòu】在【zài】显微【wēi】镜下观察【chá】细胞消【xiāo】化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿【ná】回操作台，轻敲几下【xià】培【péi】养瓶后加入2ml此细胞*培养【yǎng】基【jī】终【zhōng】止消化。轻轻吹打后吸出【chū】，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离【lí】心4分【fèn】钟，弃去上清液，加【jiā】入lmL培【péi】养液后吹匀。移入到事【shì】先准【zhǔn】备好的【de】含有5ml培养【yǎng】基的T-25培养【yǎng】瓶中或含【hán】有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

 
细胞冻存：待【dài】细胞生长状态良好时，可【kě】进【jìn】行细胞冻【dòng】存。贴壁细胞冻存时【shí】，先要消化处理【lǐ】并进行【háng】细胞计数【shù】。消化【huà】方法按【àn】照细胞传代【dài】方【fāng】法的9-22步骤进行，后【hòu】的重悬液使用血清。加DMSO至终浓度为10%。加入DMSO后【hòu】迅速混匀，按每lml的数量【liàng】分【fèn】配到冻存【cún】管

中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
 
注意事项：
收到细胞后，若发现【xiàn】干【gàn】冰己【jǐ】挥发干净、冻存管【guǎn】瓶盖脱落、破损及【jí】细胞有污染，请立即【jí】与我们电联【lián】。
所【suǒ】有动物细胞均【jun1】视【shì】为有【yǒu】潜在的生物【wù】危害性，必须【xū】在二级生物【wù】安全【quán】台内操作【zuò】，并请注意防护【hù】，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
细胞特性：
1)来源：肝癌
2)形态：上皮细胞样，贴壁生长
3)含量：>lxl06 个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性?
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
低转移人肝癌细胞(MHCC97-L)细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确【què】认细【xì】胞生长状态，去掉封口膜【mó】并将【jiāng】T25瓶置于37°C培养约【yuē】 2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长【zhǎng】满（80%-90%)请及时进行细胞传代，传代【dài】培养【yǎng】用【yòng】6ml本公司附带的【de】*培养【yǎng】基【jī】。
5.接【jiē】到【dào】细【xì】胞次【cì】日，请检查细胞是否污【wū】染，若发现【xiàn】污染或疑似污染，请及时与我们取【qǔ】得电【diàn】联。
细胞用途：仅供使用。